O-GlcNAc修饰调控NLRP3炎症小体对H9c2大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响*

张丽娜， 谢中杰， 金 慧， 张振刚， 李如君△

（1扬州大学附属医院心内科，江苏扬州225001；2台州市第一人民医院心内科，浙江台州318020）

以急性心肌梗死为代表的心血管疾病已成为威胁国民健康的主要病因之一［1］。虽然心肌再灌注治疗已普遍开展，但临床上仍存在恢复血供的心脏收舒功能恶化和恶性心律失常等损伤加重的现象，这与心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI）密切相关［2-3］。研究证实，心肌再灌注时核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）炎症小体［包括含caspase 募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain，ASC）和caspase-1］活化并引发以白细胞介素（interleukin，IL）-1β/18 产生为特征的强烈无菌性炎症反应，是导致MIRI 的重要病理生理学基础，因而调控NLRP3 炎症小体可能是减轻MIRI 的新型手段［4-5］。我们的前期实验表明，增强细胞或组织中O-连接的N-乙酰葡萄糖胺（O-linkedN-acetylglucosamine，O-GlcNAc）修饰（O-GlcNAcylation）水平，在急性应激损伤过程中具有显著的抑制炎症反应的作用［6］。但O-GlcNAc 修饰是否通过调控 NLRP3 炎症小体发挥抗炎作用以及对MIRI 的影响尚不清楚。因此，本研究通过H9c2 大鼠心肌细胞缺氧再复氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）损伤建立MIRI 的细胞模型，通过重组腺病毒感染细胞方式过表达OGlcNAc 转移酶（O-GlcNAc transferase，OGT）以提高细胞内O-GlcNAc 修饰水平，探讨其对细胞H/R 的影响及可能机制，以期为MIRI 的预防和治疗提供潜在的分子干预靶标和参考资料。

材料和方法

1 材料

H9c2 大鼠心肌细胞购自中国科学院上海生命科学院细胞库；OGT 过表达腺病毒（Ad-OGT）和空载对照腺病毒（Ad-Null）为本实验室保存；Trizol 和RIPA 裂解液购自中国北京普利莱基因技术有限公司；O-GlcNAc（CTD110.6）抗体、OGT 抗体、GAPDH 抗体、IgG 和 Protein A/G plus Agarose 购自 Santa Cruz；……