CD8+细胞毒性T淋巴细胞对HBV感染的巨噬细胞的杀伤作用*

程 辉， 臧鲁燕， 孙兆霞， 魏西军， 李冠冲， 李海波

（1齐鲁医药学院人体解剖学教研室，山东淄博255213；2潍坊市人民医院中心实验室，山东潍坊261041）

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）慢性感染全球约2.5 亿人，并增加了发展为肝硬化和肝细胞癌的风险［1］。目前HBV 感染的治疗方法无法从肝脏中完全消除病毒［2］。因此，需要新的治疗方法，包括免疫治疗成分，以实现HBV 的功能性治愈。越来越多的证据表明，受感染的巨噬细胞有助于HBV 的持续存在和发病机制［3］。尽管HBV 感染的CD4+T细胞会在感染后的几天内死亡，但体外研究表明，巨噬细胞对HBV 复制的细胞病变效应具有抵抗力，从而导致病毒持续存在［4］。此外，受感染的巨噬细胞通过逃避中和作用，能在细胞间传播中有效地将病毒传播给CD4+T细胞［5］。CD8+细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T-lymphocytes，CTL）在HBV 感染的急性和慢性阶段控制病毒水平并减少HBV 疾病进展［6］。既往大多数研究都集中在CTL 控制受感染的CD4+T 细胞上，较少关注受感染的巨噬细胞。研究表明，CTL 可以在体外消除 HBV 感染的 CD4+T 细胞［7］。然而，CTL介导的HBV 感染巨噬细胞的杀伤相对效率尚不明确。因此，本研究描述并比较了离体CTL 与HBV感染的巨噬细胞靶标的相互作用，旨在为了解感染HBV的巨噬细胞对CTL的反应提供参考资料。

材料和方法

1 实验材料

小鼠抗CD68 单克隆抗体购自Abcam；兔抗HBV核心蛋白（HBV core protein，HBc）单克隆抗体购自Diagnostic Biosystems；苏木精、Triton X-100、牛血清白蛋白和抗唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1（sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin-1，Siglec-1）抗体购自Sigma；HRP 标记的羊抗兔或鼠免疫球蛋白Ⅱ抗购自DAKO；EasySep Human CD14 Positive Selection Kit II、EasySep Human CD4+T Cell Isolation Kit、EasySep Human CD8+T 细胞分离试剂盒购自STEMCELL Technologies；24 孔或 6 孔低附着板、TC板、L-谷氨酰胺和 HEPES 购自 Corning；……