黄独胚性悬浮细胞的小滴玻璃化法超低温保存

尹明华，李诚欣，李祥媛，刘凯盈，封 昀，卢 霞，柯维忠*

(1.上饶师范学院生命科学学院，江西 上饶 334001；2.上饶市药食同源植物资源保护与利用重点实验室，江西 上饶 334001；3.上饶市薯芋类作物种质保存与利用重点实验室，江西 上饶 334001；4.上饶农业技术创新研究院，江西 上饶 334001)

【研究意义】黄独(DioscoreabulbiferaL.)为薯蓣科薯蓣属(Dioscorea)植物[1]，广泛分布于世界各地，其地下块茎又名黄药子，是传统的中药材，性凉，味苦，能清热解毒、凉血止血、化痰消瘿[2]，具有抗菌、抗炎和抗肿瘤作用，临床上一般用于治疗食道癌、胃癌、直肠癌、乳腺癌、宫颈癌、膀胱癌、肺癌及肉瘤等[3]。近年来，由于中药市场对黄药子的极大需求，黄独野生资源遭受乱采滥挖造成野生资源急剧减少；此外，长期的零余子无性繁殖和自然退化等原因促使黄独种质资源即将面临大量丢失的危险[4]，无法从根本上解决黄药子供需矛盾问题。【前人研究进展】植物细胞培养技术为大量生产药用次生代谢产物开辟了新途径[5]，前人通过筛选高产细胞系、优化培养条件和培养技术等方法来提高目标代谢产物的合成[6]。黄独胚性悬浮细胞具有增殖快，再生强，体胚多等优点[7]，并可通过生物反应器进行大规模培养生产黄独药用成分[8]。黄独胚性细胞悬浮细胞也是通过生物技术进行种质创新的基础。但是黄独胚性细胞悬浮细胞的建立非常困难，且建立后要定期继代。频繁的继代不仅耗费大量的人力和物力，易受细菌和真菌的污染，还会导致体细胞变异和植株再生能力下降甚至完全丧失。……