木犀草素调控Nrf2/HO-1通路保护视网膜色素上皮细胞氧化损伤

洪 萌，洪道先，石荣先，魏 聪，赵晓丽，李权达

•KEYWORDS: luteolin; retinal pigment epithelium; oxidative damage; nuclear factor erythroid 2-related factor 2; heme oxygenase-1

0引言

年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，ARMD)是一种累及黄斑部的不可逆退行性病变，是老年人视力损伤的主要病因之一[1]。随着我国人口老龄化的进展，ARMD的发病人群逐年增多[2]。ARMD的具体病因及发病机制尚不明确，但越来越多的研究表明视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的氧化应激损伤与ARMD的发生、发展密切相关[3-4]。因此，保护RPE细胞免受氧化应激损伤是防治ARMD的重要途径。已知E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)是机体内源性抗过氧化物的重要蛋白，被激活后可抑制过氧化物诱导细胞损伤[5]。因此调控Nrf2通路对于ARMD的防治具有潜在价值。木犀草素是一种天然的黄酮类化合物，广泛存在于金银花等多种药用植物中，具有抗炎、抗氧化及抗病毒等多种药理学作用[6]。目前研究表明木犀草素对RPE细胞及视网膜损伤具有保护作用[7-8]，但其是否能够增强RPE细胞的抗氧化活性及其抗氧化机制尚不清楚。因此，本研究采用H2O2损伤RPE细胞建立体外氧化应激损伤模型，观察木犀草素对RPE细胞氧化损伤的保护作用，并探讨其作用机制。

1材料和方法

1.1材料人RPE细胞株ARPE-19(美国ATCC公司)；木犀草素(南京景竹生物科技有限公司)；DMEM/F12培养液、胎牛血清、胰蛋白酶(美国Gibco公司)；Nrf2抑制剂全反式维甲酸、四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)和H2O2等(美国Sigma公司)；丙二醛(malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)试剂盒及酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒等(北京索莱宝科技有限公司)，Caspase-3单克隆抗体、多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(poly adeno-sine diphosphate ribose polymerase,PARP)单克隆抗体、B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)单克隆抗体、Nrf2单克隆抗体、HO-1单克隆抗体及辣根过氧化物酶标记的IgG二抗(英国，Abcam)。……