发酵饲料对育肥期文昌鸡消化酶活性及抗氧化功能的影响①

温琼 李笑春

（海南大学 海南 海口 570000）

文昌鸡是海南省唯一的国家级禽类优良地方保护品种，深受海南当地人的喜爱。文昌鸡对自然条件、饲养管理和饲喂方式要求不高，适应性强。传统文昌鸡养殖方式分为笼养和放养，主要饲喂油脂、大米、番薯等加水煮熟之后的混合物，这种传统育肥方式费时费力耗能。养殖过程中，海南文昌鸡的肠道消化吸收和抗氧化功能是重要保障，发酵饲料能够降低饲料抗营养因子、增加饲料有效能值、改善肠道菌群平衡、改善肠道形态结构、提高饲料消化利用率等多种优势，被广泛应用于畜禽养殖生产［1］。通过分析发酵饲料的饲喂对育肥期文昌鸡消化吸收和抗氧化的影响，可为生产实践提供理论基础和科学依据［2‐3］。本试验使用育肥期文昌鸡混合饲料，以酵母菌、芽孢杆菌和乳酸杆菌作为发酵菌种，利用最优发酵工艺制作发酵饲料。通过对文昌鸡饲喂不同比例的发酵饲料，揭示发酵饲料对育肥期文昌鸡抗氧化功能和肠道消化吸收功能的影响。

1 材料与方法

1.1 试验对象

试验选用105日龄体重相近、状态良好的文昌母鸡160只。随机将试验鸡分为对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组4个处理，每处理8个重复，每重复5只鸡。

采购饲料原料，经加工配制成文昌鸡育肥期混合饲料（表1），对照组采用全价日粮饲喂，其它三组分别饲喂10%、20%、30%的发酵饲料替代全价料。

表1 发酵原料配方及营养水平

1.2 发酵饲料

分别使用酿酒酵母菌、植物源性乳酸菌、蜡样芽孢杆菌3种菌株制备种子液，按酿酒酵母菌0.6×108cfu＋蜡样芽孢杆菌4×1011cfu＋植物源性乳酸杆菌1.35×108cfu配比制备活化液，将0.34 kg活化菌液加入8～9 kg水中搅匀，然后加入20 kg混合饲料中搅拌均匀，发酵5 d。

1.3 试验方法

1.3.1 发酵饲料对育肥期文昌鸡消化酶的影响

取样：从每个重复组中随机抽取2只文昌鸡屠宰、解剖、剪取肠段（十二指肠、空肠、回肠）、收集新鲜食糜约5 g，放入到离心管里，做好标记，液氮速冻，‐80℃保存备用。

测定指标：按照α‐淀粉酶测试盒、脂肪酶测定试剂盒、胰蛋白酶测定试剂盒、糜蛋白酶测定试剂盒要求，测定育肥期文昌鸡母鸡十二指肠、空肠和回肠消化酶活力。为了减小误差，进行2次平行试验。

样品预处理：取出冷冻的三段肠食糜，放入4℃冰箱解冻。准确称取5 g肠道内容物，按质量体积1∶9加入冰冷生理盐水（或pH＝7.4的PBS匀浆缓冲液），保温盒装入冰块，低温将食糜研磨成匀浆，放入离心管中。以2 500 r/min离心10 min，用移液器取上清液，做好标记分装。为了减小误差，进行两次平行试验。

测定原理：α‐淀粉酶能水解淀粉生成的葡萄糖、麦芽糖及糊精，在底物浓度已知情况下，加入碘液与未水解的淀粉结合生成蓝色复合物，根据蓝色的深浅可推算出水解的淀粉量，计算AMS的活性。

脂肪酶：甘油三酯和水制成的乳胶，因其胶束对射入光的吸收及散射而具有乳浊性状。胶束中的甘油三酯在脂肪酶的作用下发生水解，使胶束分裂，散裂光或浊度因而减低，减低的速率与脂肪酶活力有关。

1.3.2 发酵饲料对育肥期文昌鸡抗氧化机能的影响

取样：每个重复中随机取2只文昌鸡，翅静脉采血。血液静置，以3 000 r/min离心10 min，用移液枪将血清分别装入EP管中，放入‐20℃保存。

测定指标：4℃解冻预处理样品。然后依次测定十二指肠、空肠和回肠的谷胱甘肽过氧化物歧化酶活性、超氧化物歧化酶活性、总抗氧化能力、丙二醛含量、过氧化氢酶的活性。

测定原理：过氧化氢酶分解H2O2可通过加入钼酸铵迅速中止，H2O2与钼酸铵作用生成一种淡黄色的络合物，在405 nm处测定，可计算出CAT的活力。

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH‐PX）可以促进过氧化氢与还原性谷胱甘肽反应生成H2O及氧化型谷胱甘肽，谷胱甘肽过氧化物酶的活力，可用酶促反应的速度来表示，测定此酶促反应还原型谷胱甘肽的消耗，可求出酶的活性。

1.4 数据处理与分析

用标准物质OD值和浓度测定绘制标准曲线，将样品OD值代入方程计算，得到数值乘以稀释倍数，记录最终结果即为样品的实际浓度。利用Micro‐soft Excel软件对试验数据进行初步整理，SPSS 22.0分析数据，行单因素方差分析结合LSD比较分析，数据以（平均值±标准差）表示，p＜0.01表示差异极显著，p＞0.05为差异不显著，p＜0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 发酵饲料对十二指肠消化酶的影响

由表2可以看出，与对照组相比，试验Ⅰ组的文昌鸡十二指肠淀粉酶含量、糜蛋白酶活性均显著高于对照组；脂肪酶含量差异不显著（p＞0.05），试验Ⅰ组最高；胰蛋白酶含量异不显著（p＞0.05），试验Ⅰ组活性高于对照组。

表2 文昌鸡十二指肠消化酶测定结果

2.2 发酵饲料对空肠消化酶的影响

由表3可以看出，与对照组相比，试验Ⅰ组文昌鸡空肠淀粉酶极显著高于对照组（p＜0.01），糜蛋白酶含量极显著低于对照组（p＜0.01）；各试验组脂肪酶活性、胰蛋白酶活性没有显著差异（p＞0.05）。

表3 文昌鸡空肠消化酶测定结果

2.3 发酵饲料对回肠消化酶的影响

由表4可以看出，试验Ⅰ组文昌鸡回肠淀粉酶、胰蛋白酶均极显著高于对照组（p＜0.01），糜蛋白酶活性极显著低于对照组（p＜0.01）各处理胰蛋白酶的活性差异不显著（p＞0.05），试验Ⅰ组胰蛋白酶含量最高。

表4 文昌鸡回肠消化酶测定结果

2.4 发酵饲料对回肠抗氧化性的影响

由表5可以看出，各处理总抗氧化能力（T‐AOC）差异不显著，试验组超氧化物歧化酶（SOD）含量显著高与对照组，试验Ⅰ组过氧化酶（CAT）显著高于对照组（p＜0.05），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH‐PX）活性差异不显著，试验Ⅰ组的丙二醛（MDA）含量显著低于对照组（p＜0.05）。

表5 文昌鸡的抗氧化指标

3 讨论

肠道消化酶主要来源于三种途径，通过环境或者食物从外界获取，自身机体代谢分泌获取以及机体的肠道微生物［4］。脂肪酶是特殊的酯键水解酶，控制消化吸收；淀粉酶主要水解淀粉和糖原；胰蛋白酶和糜蛋白酶属于蛋白分解酶，在水解过程中，能够分解消化饲料中的氨基酸。混合饲料在发酵过程中会产生小分子肽等物质，文昌鸡通过饲喂从外界获取，再经过自身的消化转化被吸收和利用。肠道消化酶中，淀粉酶、胰蛋白酶、脂肪酶和糜蛋白酶有着重要作用，影响饲料的消化利用。消化酶活性升高，可推论动物机体对日粮营养物质的消化吸收能力高，这有利于动物的生长发育。因此，添加发酵饲料能不同程度提高鸡十二指肠消化酶、淀粉酶和总蛋白水解酶的活性，这点与本研究结果一致。本研究使用的是酵母菌、芽孢杆菌和乳酸杆菌为菌种的发酵饲料。试验组糜蛋白酶活性均低于对照组，可能是由于本试验所用的发酵饲料营养物质中粗蛋白含量偏低所致。试验组中脂肪酶与胰蛋白酶活性出现先上升后下降趋势。随着发酵饲料添加量的增加，食糜酸性增加，为消化酶发挥作用提供了良好环境，增加了小肠消化酶活力。因此，发酵饲料可以一定程度上改善鸡小肠消化机能，但当发酵饲料添加量过多，微生物发酵过程中产生酸类物造成动物肠道pH值下降，影响脂肪酶和胰蛋白酶的分泌和活性。

本试验结果表明，添加10%发酵饲料，肠道对发酵饲粮的养分利用率更高，有助于育肥期文昌鸡母鸡对饲料的消化吸收及利用。说明发酵饲料的添加能提高酶活性，这可能是由于饲料中的菌群能能更好被吸收溶解，进一步提高了酶的活性，具体机制有待进一步研究。

鸡血液指标改变能够综合反映机体的健康程度，机体自身也能通过免疫系统的调节维持稳定。GSH‐Px、SOD、CAT和AOC都是动物机体重要的抗氧化酶。大量资料证实，丙二醛（MDA）会导致机体内的生物膜因过氧化而损伤，引发机体细胞和组织的变异，从而引起一系列健康问题。因此，机体内丙二醛（MDA）的含量可以间接反映机体内脂质过氧化的程度以及细胞的受损情况。血清中超氧化物歧化酶（SOD）常与丙二醛（MDA）结合辅助探究机体抗氧化性能，其活性可以侧面体现机体清除自由基的能力［5］。超氧化物歧化酶（SOD）对动物机体的氧化与抗氧化平衡更具有不可替代作用［6］，可以及时清除机体内需氧生物代谢遗留的氧自由基，还能保护机体细胞免受损伤［7］。动物机体在代谢过程中会产生大量过氧化氢，然而，过氧化氢却是加速身体衰老的元凶，会对健康造成威胁。过氧化氢酶（CAT）的主要可以将过氧化氢分解成水和氧气，从而减少由于过氧化氢对动物机体氧化而造成的伤害［8］。动物机体中也存在其他与过氧化氢分解有关的酶，谷胱甘肽过氧化物酶（GSH‐PX）是存在最广泛的一种酶，其特有的催化还原型谷胱甘肽可以还原过氧化氢，可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用［9］。这一氧化还原反应中还原型谷胱甘肽的消耗量［10］即可反应谷胱甘肽过氧化物酶（GSH‐PX）的活力。

本研究试验Ⅰ组AOC活性比对照组高，这意味着发酵饲料可以增强机体的总抗氧化能力，对文昌鸡机体的抗氧化能力有积极作用，发酵饲料可以显著提高育肥期文昌鸡血清中的超氧化物歧化酶、过氧化酶、谷胱甘肽过氧化物歧化酶活性。

综合考虑，认为10%发酵饲料的添加组能够提升机体的抗氧化功能。