栀子苷对结直肠癌细胞增殖和凋亡及Akt/MDM2/p53 通路的影响

于雅勤 沈加熙 张 虹

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是世界范围内最常见、最致命的恶性肿瘤之一[1]。由于缺乏早期症状和有效的筛查策略，患者诊断时通常为晚期[2]。虽然CRC 分子靶向治疗和免疫治疗已取得重大进展[3]，但患者的预后仍较差。因此，寻找一种有效的CRC 治疗方式并探索其潜在的调控机制十分必要。从药用植物或草药中提取的天然产物是治疗CRC的重要补充疗法[4]。栀子苷（geniposide，GEN）是一种类环烷苷，具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤等多种生物活性[5-6]。研究表明，GEN 通过阻断HepG2 和HuH7 细胞Wnt/β-catenin 和AKT 级联通路抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡，从而发挥抗肿瘤作用[7]。然而，GEN对CRC 的影响和作用机制仍不清楚。因此，本研究旨在探讨GEN 对CRC 细胞增殖及凋亡的影响及其可能作用机制。

1 材料与方法

1.1试 剂 GEN（批号YRZ005，纯度：≥98%）购自仪睿生物科技有限公司，胎牛血清（批号10099141C）、Dulbecco 改良Eagle’s 培养基（DMEM，批号11965092）购自美国Gibco 公司，四甲基偶氮唑盐（MTT，批号11465007001）、二甲基亚砜（DMSO，批号276855）购自美国Sigma 公司，Annexin V-FITC/PI 双染试剂盒（批号556419）购自BD Biosciences 公司，一抗p-Akt（sc-271964）、Akt（sc-81434）、p-MDM2（sc-53368）、p-p53（sc-135772）、p53（sc-393031）、MDM2（sc-5304）、cyclin B1（sc-7393）、Bcl-2（sc-7382）和β-actin（sc-47778）购自Santa Cruz Biotechnology 公司。

1.2细胞来源及培养 人CRC 细胞系（HCT-8、SW-480、HT-29、DLD-1）和人永生化健康结肠细胞CCD-18Co 来自中国科学院（上海）细胞库。细胞系置于含10%胎牛血清、1U/mL 青霉素G、1μg/mL 链霉素的DMEM，在37℃和5%CO2的潮湿环境中培养和维持。

1.3细胞活力测定 CRC 细胞（2×105细胞）和CCD-18Co 细胞（5×104细胞）接种于96 孔板中，用不同浓度（0～200μM）的GEN 孵育24h 或48h 后每孔加入30μL 的5mg/mL 四甲基偶氮唑盐（MTT）溶液，37℃孵育4h，去掉培养液，加入150μL DMSO 溶解甲醛晶体。使用微板阅读器在540nm 处读取每个样品的吸光度。计算所有细胞系的半数抑制浓度（IC50），其中一株细胞在进一步的实验中被用来阐明GEN 的作用机制。……