多花黄精非药用部位活性成分及抗氧化性比较

王天梅 王华磊 李丹丹 陈松树 潘克琴

(1. 贵州大学农学院，贵州 贵阳 550025；2. 贵州省药用植物繁育与种植重点实验室，贵州 贵阳 550025)

多花黄精(Polygonatumcyrtonema)为百合科黄精属植物，是2020版《中国药典》收录的中药材黄精基原物种之一[1]，具有健脾润肺、滋阴益肾之效[2]，含有丰富的多糖、黄酮、皂苷和酚类等成分[3]，是传统的药食同源植物。目前多花黄精的食药部位主要为根、茎，其研究也集中于根、茎的炮制加工、活性成分提取及药理功效等[4]，而须根、茎、叶则作为副产物被丢弃。

黄申等[5-6]研究发现，多花黄精嫩芽和花均表现出极好的DPPH· 清除能力，赵海洋等[7]发现多花黄精根、茎、叶和花部位的抗氧化活性大小与其黄酮含量一致。此外，李悦等[8]推测总酚可能是多花黄精花部位潜在的抗氧化物，同时也有研究[9]指出酚类成分能与亚硝酸根作用从而达到清除亚硝酸盐的作用，但尚未见利用多花黄精的非药用部位提取物来清除亚硝酸盐的报道。试验拟采用同一提取方式对多花黄精非药用部位的醇溶性成分(总酚、总皂苷和总黄酮)进行提取，研究其对DPPH· 和· OH的清除作用，同时探究其对亚硝酸盐的清除能力，以期为多花黄精非药用部位天然抗氧化剂的开发以及在食品和医药领域的应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

多花黄精样本：采自贵州大学教学实验场，分为须根、茎、叶、花、芽5个部位，经90 ℃杀青后，于60 ℃烘箱干燥至恒重，粉碎过60目筛于-20 ℃冰箱贮藏备用；

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(批号MFCD00007231)、盐酸萘乙二胺(批号c11838573)：上海麦克林生化科技有限公司；

人参皂苷Rb1(MUST-20060101)：成都曼思特生物科技有限公司；

芦丁(MUST-17111601，质量分数≥98%)、没食子酸(810H022)、福林酚(1216O033)：北京索莱宝科技有限公司；

冰乙酸：分析纯，天津市富宇精细化工有限公司；

NaOH、高氯酸：分析纯，成都金山化学试剂有限公司；

Al(OH3)3、水杨酸：分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；

Na2CO3、亚硝酸钠、FeSO4：分析纯，天津市永大化学试剂有限公司；

对氨基苯磺酸：分析纯，天津市致远化学试剂有限公司。

1.2 仪器与设备

电子分析天平：AR224CN型，奥豪斯仪器(常州)有限公司；

电热鼓风干燥箱：101-4型，北京科伟永兴仪器有限公司；

全波长酶标仪：Multiskan型，美国Thermo公司；

超声波清洗器：SQ8200型，上海冠特超声仪器有限公司；

紫外可见分光光度计：UV-2600型，岛津企业管理(中国)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 醇溶性成分测定

(1) 提取液制备：参照文献[6]并稍有改动。准确称取多花黄精须根、茎、叶、花、芽5个不同部位的样品粉末各1.000 g，以80%甲醇为提取溶剂，30 ℃超声提取30 min，抽滤即得待测液，于-4 ℃冰箱贮藏备用，每个样本重复3次。

(2) 总黄酮含量测定：采用铝盐显色法[10]。移取待测液2.5 mL，加入5% NaNO2溶液0.3 mL，摇匀后静置6 min，再加10% Al(NO3)3溶液0.3 mL，摇匀，静置6 min后加入4% NaOH溶液4 mL，摇匀后用蒸馏水定容至10 mL，静置15 min，测定500 nm处吸光度。以质量浓度0.105 g/mL的芦丁对照品绘制标准曲线，回归方程为Y=0.643 3X+0.017 8，R2=0.991 2。

(3) 总皂苷含量测定：采用比色法[11]。移取待测液100 μL挥干，加入5%香草醛—冰乙酸0.2 mL(新鲜)，冰浴加入0.8 mL高氯酸，摇匀，60 ℃水浴15 min，冰浴2 min，加入冰乙酸5 mL，摇匀静置5 min，测定550 nm处吸光度。以质量浓度0.103 mg/mL的人参皂苷Rb1对照品绘制标准曲线，回归方程为Y=19.009X+0.006 3，R2=0.998 7。

(4) 总酚含量测定：采用福林酚比色法[12]。移取待测液2.5 mL，加入福林酚显色剂0.5 mL，充分震荡后静置8 min，加入15% Na2CO3溶液2 mL，摇匀，室温下避光放置2 h，测定765 nm处吸光度。以质量浓度0.264 mg/mL的没食子酸对照品绘制标准曲线，回归方程为Y=14.31X+0.083 9，R2=0.996。

1.3.2 抗氧化能力测定

(1) DPPH·清除活性：参照文献[13]并修改。在反应体系中加入待测液3 mL和5 mmol/L DPPH乙醇溶液5 mL，混匀，室温静置30 min，以5 mL无水乙醇和3 mL蒸馏水的混合液为参比，测定517 nm处吸光度，并按式(1)计算DPPH·清除率。

(1)

式中：

A——DPPH·清除率，%；

A0——只加DPPH乙醇溶液的吸光度；

A1——样品和DPPH乙醇溶液的吸光度；

A2——样品溶液的吸光度。

(2) ·OH清除能力：参照文献[14]并修改。向试管中分别加入6 mmol/L的FeSO4溶液、6 mmol/L的H2O2溶液、6 mmol/L的水杨酸和待测液各2 mL，37 ℃反应1 h，测定517 nm处吸光度，并按式(2)计算·OH清除率。

(2)

式中：

A——·OH清除率，%；

A0——蒸馏水代替样品的吸光度；

A1——样品吸光度；

A2——蒸馏水替代H2O2时的吸光度。

(3)

式中：

A——亚硝酸根离子清除率，%；

A0——水代替样品的吸光度；

A1——不同质量浓度样品的吸光度。

1.4 数据分析

使用SPSS 26.0软件进行统计学分析。

2 结果与分析

2.1 活性成分分析

由表1可知，多花黄精非药用部位中总酚含量大小顺序依次为叶>嫩芽>花>茎>根，叶部总酚含量显著高于其他部位；总皂苷以花部位含量最高(0.63 mg/g)，显著高于其他各部位，根部含量最低，为0.33 mg/g，其他部位总皂苷含量排序为叶>嫩芽>茎；总黄酮含量大小排序为叶>嫩芽>花>茎>根，说明相较于其他部位而言，叶在生长发育进程中更容易富集酚类成分，花则更容易富集皂苷类成分。因此，多花黄精非药用部位在同一提取水平下，各活性成分含量差异显著(P<0.05)。

表1 多花黄精非药用部位活性成分含量†

2.2 抗氧化活性对比

小写字母不同表示差异显著(P<0.05)

2.3 抗氧化活性和清除能力与活性成分含量的相关性

方形表示相关性，颜色从浅至深表示相关系数由0.4到1.0；圆形表示显著性，颜色深表示极显著(P<0.01)

多花黄精各部位的抗氧化和亚硝酸盐清除能力与活性成分含量密切相关，且各成分清除自由基机理存在差异，酚类成分共有的多羟基结构起到抗氧化作用主要是通过电子转移将DPPH·清除[16]，而皂苷类化合物结构中的-OH基团、皂苷元配基的结构和糖残基的数量决定其抗氧化活性[8]，对亚硝酸盐的清除作用与提取物富含多酚有关，因酚性羟基极易发生氧化、聚合、缩合等变化，从而清除自由基。有研究[17]也证实了植物多酚清除亚硝酸盐与体系中多酚种类及含量密切相关。综上，黄精非药用部位提取物的抗氧化活性和亚硝酸盐清除作用，可能是多种活性成分之间相互作用的结果，发挥主要功能的成分种类还有待进一步探索。

3 结论