利用β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶快速酶切分析中国仓鼠卵巢细胞表达的西妥昔单抗抗原结合区的聚糖比例

程 倩, 贾戴辉, 张博慧, 许俊彦, 邵 喆, 黄应峰, 邹 洵

(宝船生物医药科技(上海)有限公司, 上海 201203)

治疗性单克隆抗体(mAb)药物是以一类γ型免疫球蛋白为结构基础的大分子蛋白类药物,而西妥昔单抗(cetuximab,商品名爱必妥)是最早上市的被美国食品药品监督管理局(FDA)批准的抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体,用于转移性结直肠癌和头颈鳞状细胞癌的治疗。默克公司生产的原研药采用的细胞系为小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0),该细胞系在糖基化的表达过程中会形成N-羟乙基神经氨酸(NGNA)与α-半乳糖(α-Gal),据文献[1,2]报道,SP2/0表达的西妥昔单抗在临床上的副作用主要是出现严重的超敏反应,具体表现如呼吸困难、胸闷、皮肤瘙痒和视觉障碍等。而经中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达的西妥昔单抗,虽具有相同的氨基酸序列,但在糖基的组成和种类上存在很大差异,主要表现为形成N-乙基神经氨酸(NANA)的唾液酸化糖型修饰,且不再含有α-Gal,大大降低了潜在的免疫原性风险[3-5]。

截至目前,已上市的单克隆抗体药物绝大多数都是含有2个糖基化位点,且对称分布于两条重链上[6-8]。而已上市的西妥昔单抗是唯一一个具有4个糖基化位点的单抗药物,其中抗原结合片段(Fab)的2个糖基化位点位于高可变区(VH),可结晶片段(Fc)的2个糖基化位点位于恒定区2(CH2)。西妥昔单抗由SP2/0细胞表达,糖基化更加复杂,并伴随大量的唾液酸化,导致其具有显著的电荷异质性[9,10]。目前国内外许多研究者开始开发以CHO细胞表达的西妥昔单抗,相比于SP2/0细胞表达,在Fab和Fc段的糖基化修饰上会有比较大的差异,特别是Fab段,不再含有a-Gal和NGNA,取而代之的是大量的NANA。……