内皮蛋白C受体在重度子痫前期孕妇胎盘组织和血浆中的表达及意义

张佳 刘芳 郑丹

[摘要] 目的 探討内皮蛋白C受体（ERCR）在重度子痫前期孕妇胎盘组织和血浆中的表达及意义。 方法 选取2017年5月至2020年6月南昌市第一医院接收的70例重度子痫前期孕妇（研究组）和70名健康孕妇（健康组）作为本研究对象，两组进行胎盘组织和血浆ERCR检测，比较两组的血浆游离ERCR水平、胎盘组织结合型ERCR mRNA相对表达量和胎盘组织结合型ERCR蛋白阳性表达率;同时根据重度子痫前期的类型，比较早发型和晚发型孕妇的血浆游离ERCR水平、胎盘组织结合型ERCR mRNA相对表达量和胎盘组织结合型ERCR阳性表达率。 结果 经检测，研究组的血浆游离ERCR水平明显高于健康组，其胎盘组织结合型ERCR mRNA相对表达量明显低于健康组（P<0.001）;同时，研究组的胎盘组织结合型ERCR蛋白阳性表达率（58.57%）明显低于健康组（97.14%）（P<0.001）。在重度子痫前期类型方面，早发型孕妇的血浆游离ERCR水平明显高于晚发型孕妇，其胎盘组织结合型ERCR mRNA相对表达量明显低于晚发型孕妇（P<0.001）;且早发型孕妇胎盘组织结合型ERCR蛋白阳性表达率（32.44%）也低于晚发型孕妇（87.87%）（P<0.001）。 结论 早发型重度子痫前期孕妇胎盘组织和血浆中的ERCR表达明显升高，而晚发型重度子痫前期孕妇胎盘组织和血浆中的ERCR无明显变化，ERCR可作为早发型重度子痫前期的预测指标。

[关键词] 重度子痫前期;孕妇;胎盘组织;血浆;内皮蛋白C受体

[中图分类号] R714.245          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2022）02-0009-04

Expression and significance of endothelial protein C receptor in placental tissue and plasma of pregnant women with severe preeclampsia

ZHANG Jia   LIU Fang   ZHENG Dan

Department of Gynecology and Obstetrics， Nanchang First Hospital， Nanchang   330000， China

[Abstract] Objective To investigate the expression and significance of endothelial protein C receptor （ERCR） in placental tissue and plasma of pregnant women with severe preeclampsia. Methods A total of 70 pregnant women with severe preeclampsia （study group） and 70 healthy pregnant women （healthy group） who were admitted to Nanchang First Hospital from May 2017 to June 2020 were selected as the research objects， and the placental tissue and plasma ERCRs were detected in the two groups. The plasma free ERCR levels， relative expression levels of binding ERCR mRNA and positive expression rates of binding ERCR protein in the placental tissue were compared between the two groups. Meanwhile， according to the type of severe preeclampsia， the levels of plasma free ERCR， the relative expression levels of placental tissue binding ERCR mRNA and the positive expression rates of placental tissue binding ERCR were compared between the early onset and late onset pregnant women. Results The level of free ERCR in plasma in the study group was significantly higher than that in the healthy group， and the relative expression of placental tissue binding ERCR mRNA in the study group was significantly lower than that in the healthy group （P<0.001）. Meanwhile， the positive expression rate of placental tissue binding ERCR protein in the study group was 58.57%，which was significantly lower than that of 97.14% in the healthy group （P<0.001）. For the type of severe preeclampsia， the plasma free ERCR level of early onset women was significantly higher than that of late onset women， and the relative expression level of placental tissue binding ERCR mRNA of early onset women was significantly lower than that of late onset women （P<0.001）. The positive expression rate of placental tissue binding ERCR protein in early onset pregnant women was 32.44%， which was also lower than that of 87.87% in late onset pregnant women （P<0.001）. Conclusion The expression of ERCR in the placental tissue and plasma of pregnant women with early onset severe preeclampsia significantly increase， while the expression of ERCR in the placental tissue and plasma of pregnant women with late onset severe preeclampsia does not significantly change. ERCR can be used as a predictor of early onset severe preeclampsia.

[Key words] Severe preeclampsia; Pregnant women; Placental tissue; Plasma; Endothelial protein C receptor

重度子痫前期属于妊娠期高血压最为严重的一个阶段，极易引起胎盘早剥、胎儿宫内窘迫、产后出血等，对孕妇及胎儿的生命安全构成极大威胁[1-2]。重度子痫前期根据发病孕龄可分为早发型和晚发型，孕龄<34周发病为早发型，孕龄≥34周为晚发型[3]。有学者认为，血管内皮细胞损伤与妊娠期高血压的发生、发展密切相关，内皮蛋白C受体（endothelial protein C receptor，ERCR）作为蛋白C系统的重要成员之一，其在细胞凋亡、炎症反应中起到重要作用，与多种疾病的发生、发展有着一定的联系[4-5]。而重度子痫前期的发生预示着孕妇血管内皮细胞损伤，这一损伤会严重影响ERCR功能，但对于ERCR与该疾病的发生、发展关系尚未明确定论。基于此，本研究选取2017年5月至2020年6月南昌市第一医院接收的70例重度子痫前期孕妇和70名健康孕妇作为研究对象，旨在探讨重度子痫前期孕妇胎盘组织和血浆中的ERCR表达及其意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

选取2017年5月至2020年6月南昌市第一医院接收的70例重度子痫前期孕妇（研究组）和70名健康孕妇（健康组）作为本研究对象。健康组年龄22～36岁，平均（29.68±4.28）岁;孕次1～3次，平均（2.01±0.23）次;孕龄32～36周，平均（33.15±0.52）周。研究组年龄23～36岁，平均（26.75±4.32）岁;孕次1～3次，平均（2.03±0.25）次;孕龄32～36周，平均（33.18±0.53）周;早发型37例[年龄23～34岁，平均（26.53±4.21）岁;孕次1～3次，平均（2.01±0.33）次;孕龄32～35周，平均（33.05±0.48）周]，晚发型33例[年龄25～36岁，平均（26.57±4.27）岁;孕次1～3次，平均（2.03±0.34）次;孕龄33～36周，平均（33.07±0.49）周]。两组的年龄、孕次和孕龄比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性;同时，早发型和晚发型孕妇的一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。纳入标准：①研究组孕妇均符合《妇产科学》[6]中有关重度子痫前期诊断标准;②均为单胎妊娠者;③具备正常理解沟通交流能力者;④孕婦及其家属对本研究均知情，且已签署知情同意书。排除标准[7]：①合并心肝肾功能不全者;②胎儿存在先天性疾病或胎膜早破者;③孕妇和胎儿存在感染者;④存在精神疾病既往史者。本研究已获得医院医学伦理委员会审查批准。

1.2 方法

予以两组胎盘组织和血浆ERCR检测，具体方法如下：①采集孕妇晨起空腹静脉血4 ml，将血液标本静置30 min，由专业检验人员进行离心处理，离心半径10 cm，速率3000 r/min，离心15 min分离血浆，采用美国Beckman Coulter公司生产的全自动生化分析仪（型号为AU5800），通过酶联免疫吸附法测定孕妇的血浆游离ERCR水平。②待孕妇分娩后，收集胎盘中央部位，去除并底蜕膜层，注意避开钙化坏死部位，于丛密绒毛膜层采集2份胎盘组织，标本大小为1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm。使用DEPC溶液彻底冲洗胎盘组织标本，置于液氮、-80℃环境下保存。取1份胎盘组织剪碎并充分研磨，将其加到组织裂解液中充分裂解。随后由专业检验人员进行离心处理，半径为15 cm，速率为3000 r/min，时间10 min，将上清液分离，并进行PCR扩增，计算胎盘组织结合型ERCR mRNA相对表达量。③将剩余的1份胎盘组织置于10%的中性甲醛中固定24 h，行石蜡包埋，连续4 μm厚切片，滴入50 μl兔抗人ERCR多克隆抗体，进行常温孵育，24 h后加入0.1 ml生物素山羊抗大鼠工作液，置于37℃中孵育，时间为30 min。行二氨基联苯胺显色，衬染、脱水透明均使用苏木精，行中性树胶封片。在400倍镜下观察孕妇胎盘组织结合型ERCR阳性表达率。判断标准[8]：以评分方式表示阳性细胞百分比和染色强度，阳性细胞百分比<5%、无着色分别为0分;阳性细胞百分比为5%～20%、淡黄色分别为1分;阳性细胞百分比>20%～50%、黄色分别为2分;阳性细胞百分比>50%、棕黄色分别为3分。阳性细胞百分比值+染色强度值，0～1分即阴性，2分即弱阳性，3～4分即中度阳性，5～6分即强阳性。

1.3观察指标

比较两组的血浆游离ERCR水平、胎盘组织结合型ERCR mRNA相对表达量和胎盘组织结合型ERCR蛋白阳性表达率。同时，根据重度子痫前期的类型，比较早发型和晚发型孕妇的血浆游离ERCR水平、胎盘组织结合型ERCR mRNA相对表达量和胎盘组织结合型ERCR阳性表达率。

1.4统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验;计数资料以[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。P<0.001为差异有极其显著的统计学意义。

2结果

2.1 两组的血浆游离ERCR水平、胎盘组织结合型ERCR mRNA相对表达量比较

经检测，研究组的血浆游离ERCR水平明显高于健康组，其胎盘组织结合型ERCR mRNA相对表达量低于健康组（P<0.001）。见表1。

2.2 两组的胎盘组织结合型ERCR蛋白阳性表达率比较

研究组的胎盘组织结合型ERCR蛋白阳性表达率明显低于健康组孕妇（P<0.001）。见表2。

2.3 早发型和晚发型孕妇的血浆游离ERCR水平、胎盘组织结合型ERCR mRNA相对表达量比较

早发型孕妇的血浆游离ERCR水平明显高于晚发型孕妇，其胎盘组织结合型ERCR mRNA相对表达量明显低于晚发型孕妇（P<0.001）。见表3。

2.4 早发型和晚发型孕妇的胎盘组织结合型ERCR蛋白阳性表达率比较

与晚发型孕妇相比，早发型孕妇的胎盘组织结合型ERCR蛋白阳性表达率更低（P<0.001）。见表4。

3 讨论

妊娠期高血压是妊娠期间特有的疾病，根据病情的严重程度可分为子痫前期、先兆子痫和子痫期[9-11]。据流行病学调查显示[12]，我国9.4%～10.4%的妊娠妇女合并有高血压，该孕期并发症是导致孕妇和围产儿不良预后的主要因素之一。子痫前期主要发于妊娠20周以后，且胎盘功能趋于成熟，分娩后能在一定程度上缓解孕妇病情，由此得知，胎盘组织与子痫前期的发生、发展存在一定关系[13-15]。重度子痫前期作为妊娠期高血压最为严重的阶段，如何及时发现、干预是现阶段临床妇产科所关注的重点。

本研究结果显示，经检测，研究组的血浆游离ERCR水平明显高于健康组，其胎盘组织结合型ERCR mRNA相对表达量明显低于健康组（P<0.001）;同时，研究组的胎盘组织结合型ERCR蛋白阳性表达率明显低于健康组（P<0.001），提示与健康孕妇相比，重度子痫前期孕妇胎盘组织和血浆中的ERCR表达情况出现显著变化。究其原因为滋养细胞凋亡、胎盘着床浅、炎症反应、血管内皮细胞损伤等是引起重度子痫前期的关键因素[16-17]。蛋白C系统作为重要抗凝系统，其能有效抑制细胞凋亡、内皮炎症反应，对内皮细胞起到重要的保护作用。ERCR作为蛋白C系统的重要成员，其主要表达于胎盘、血管内皮细胞表面、肝脏等。而ERCR能激活蛋白C，使其发挥生物学作用，且ERCR具有游离ERCR和结合型ERCR两种类型，前者可抑制蛋白C活化、抗凝活性产生，后者能调节蛋白复合物[18]。重度子痫前期的发生则会影响ERCR功能，使其在孕妇胎盘组织和血浆中的表达发生变化。

本研究结果显示，早发型孕妇的血浆游离ERCR水平明显高于晚发型孕妇，其胎盘组织结合型ERCR mRNA相对表达量明显低于晚发型孕妇（P<0.001）;且早发型孕妇胎盘组织结合型ERCR蛋白阳性表达率也低于晚发型孕妇（P<0.001），提示ERCR在早发型和晚发型中的表达存在较大差异性。结合型ERCR可与活化蛋白C进行结合，能有效抑制中性粒细胞活性，减少炎症因子释放，进而减轻血管内皮细胞损伤。在胎盘组织中，ERCR的表达降低则会减少活化蛋白C生成，使机体炎症反应激活，对血管内皮细胞造成损伤，引起血管痉挛，进而诱发早发型重度子痫前期[19-20]。而晚发型重度子痫前期的ERCR表达无明显变化，这可能与胎盘灌注障碍不是此类型的主要影响因素、病变为直接母体反应有关。同时，胎盘组织的ERCR表达减少，会导致活化蛋白C水平降低，使血管内皮损伤加剧，此时结合型ERCR会经由胎盘内皮细胞进入血浆中，此时血浆游离ERCR水平会过度表达。而血浆游离ERCR水平升高会加剧机体炎症反应，进一步损伤血管内皮细胞，抑制蛋白C抗凝活性，并增加血管壁冲击力、血液张力，引起血压升高，继而诱发早发型重度子痫前期。

综上所述，重度子痫前期的发生、发展与胎盘组织和血浆中的ERCR表达存在一定关系，而早发型重度子痫前期孕婦胎盘组织和血浆中的ERCR表达明显升高，而晚发型重度子痫前期孕妇胎盘组织和血浆中的ERCR无明显变化，ERCR可作为早发型重度子痫前期的预测指标。

[参考文献]

[1] 李东青，熊秀华.不同严重程度子痫前期患者血浆sEPCR、TAFI及APC的表达水平及临床意义[J].临床合理用药杂志，2018，11（7）：45-47.

[2] 程晓利，叶露.孕妇子痫前期血清sEng、sFlt-1水平与临床病情严重程度的相关性[J].实验与检验医学，2020， 38（5）：966-968，978.

[3] 吴晓霞.胎盘组织缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子及其受体-1水平在子痫前期中的表达研究[D].青岛：青岛大学，2019.

[4] 葛会生，王寒冰，黄冬妮，等.IL-27通过JAK2/STAT1信号通路影响血管内皮细胞功能参与子痫前期发病机制的相关研究[J].重庆医科大学学报，2019，44（1）：1-5.

[5] 黄丽琼，郑波，张元珍.早发型重度子痫前期患者血清2-ME水平和胎盘COMT表达及其意义[J].国际检验医学杂志，2019，40（14）：1754-1758.

[6] 谢辛，苟文丽.妇产科学[M].8版.北京：人民卫生出版社，2013：64-71.

[7] 王小艳，俞丁丁.Notch信号通路配体Jagged1与DLL4在子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及意义[J].浙江医学，2019，41（9）：924-926，929.

[8] 赵金珩，王茜，桑雪梅，等.联合检测血清中可溶性血管内皮生长因子受体-1、胎盘生长因子、Survivin表达水平在早发型子痫前期诊断中的价值研究[J].中国医师进修杂志，2019，42（8）：727-730.

[9] 忽平，陈丽珍.子痫前期患者胎盘组织整合素β1热休克蛋白70表达水平及临床意义[J].安徽医学，2020，41（2）：186-190.

[10] 黄淑晖，陈小青，谢小花，等.子痫前期孕妇血清及胎盘组织中色素上皮衍生因子、血管内皮生长因子蛋白的表达变化[J].山东医药，2019，59（28）：66-69.

[11] 邹强，张其华，李璃.不同型重度子痫前期患者胎盘组织STAU1、PLGF表达与妊娠结局[J].中国计划生育学杂志，2020，28（12）：2004-2007.

[12] 肖欢，梅军华，张志安，等.子痫前期胎盘组织中Endoglin、PAI-1、Flt-1蛋白的表达及临床意义探讨[J].中国优生与遗传杂志，2019，27（7）：830-833.

[13] 李芳，贾立媛，邢雅玲.65例妊娠晚期子痫前期孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1精氨酸加压素水平和凝血功能检测[J].中国妇幼保健，2020，35（24）：73-75.

[14] 王焕萍，武海英，王瑜，等.子痫前期孕妇胎盘组织中miR-30d和GCM-1的表达对滋养细胞生物学特性的影响[J].中华妇产科杂志，2019，54（7）：476-479.

[15] 王元元，蔡克涛，李晓强，等.探讨晚期氧化蛋白产物、内皮素1、DLX3和Syncytin在子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及其临床意义[J].中国生育健康杂志，2019， 30（4）：371-373，382.

[16] 卢涛，郝建民，张凯.胎盘生长因子与可溶性血管内皮生长因子受体-1预测子痫前期高危孕妇发病的价值研究[J].中国医学工程，2019，27（7）：23-26.

[17] 周美芳.子痫前期患者肾脏血流动力学参数与血管内皮损伤因子的相关性研究[J].现代实用医学，2019，31（7）：866-868.

[18] 杨勉，回广飞.妊娠早期血清可溶性血管内皮生长因子受体-1、促血管生成因子与子痫前期相关性研究[J].临床军医杂志，2019，47（7）：700-701.

[19] 马田君，赵秀真，房振亚.内皮蛋白C受体在重度子痫前期孕妇胎盘组织和血浆中表达及意义[J].中华实用诊断与治疗杂志，2020，34（9）：909-912.

[20] 赵桂玉，贾媛媛，朱锦明.子痫前期孕妇胎盘及血清中AT1-AA和VCAM-1表达水平变化及其与病情严重程度关系[J].实用预防医学，2020，27（12）：127-129.

（收稿日期：2021-03-10）