circPRKCI靶向miR-217对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的影响

刘 颁，姜丕桥，熊桂丽，焦 奇

急性心肌梗死等心血管疾病是威胁人类生命安全的主要疾病，再灌注治疗可缓解心肌缺血缺氧，同时也可加重缺血再灌注损伤，从而降低治疗效果，已知氧化应激、细胞凋亡等是导致心肌细胞损伤的主要原因，因此，如何减轻心肌细胞损伤成为治疗缺血再灌注损伤的研究热点[1]。环状RNA(circRNA)可充当微小RNA(miRNA)的海绵分子，参与心肌细胞损伤过程，并可能作为治疗的潜在靶标[2-4]。circPRKCI在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中呈低表达，上调其表达可通过miR-545/ZEB2分子轴减轻细胞损伤[5]。但circPRKCI在心肌细胞损伤中的作用机制尚未明确。靶基因预测显示miR-217与circPRKCI存在结合位点，抑制miR-217表达通过核转录因子-κB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径可防止心肌缺血-再灌注损伤[6]。但circPRKCI是否通过靶向调控miR-217表达影响缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤尚未明确。本研究采用H/R诱导的心肌细胞建立细胞损伤模型，探讨circPRKCI/miR-217对H/R诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡的影响及可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料与试剂 大鼠心肌细胞H9c2购自上海弘顺生物科技有限公司；DMEM培养基购自美国Gibco公司；Lipofectamine2000、Trizol购自美国Invitrogen公司；反转录与荧光定量聚合酶链反应(PCR)试剂购自北京天根生化科技有限公司；pcDNA、pcDNA-circPRKCI购自美国Invitrogen公司；miR-NC、miR-217 mimics、si-NC、si-circPRKCI、anti-miR-NC、anti-miR-217购自广州锐博生物科技有限公司；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所；凋亡检测试剂盒购自美国Sigma公司；兔抗鼠Bcl-2、Bax抗体购自美国Santa Cruz公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG二抗购自美国Abcam公司。……