HMGB1 在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

时红萍，刘洪敬，葛欣，黄姝，陈友山，时黎明

1.菏泽市立医院肿瘤科，山东菏泽 274000；2.菏泽市立医院检验科，山东菏泽 274000

非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要类型，由于早期缺少典型的症状表现， 部分患者仅表现为咳嗽、胸部闷痛、低热等症状，所以约75%的患者确诊时已步入疾病的中晚期，生存时间较短[1-2]。 因此，尽早诊断与积极治疗NSCLS 对于改善患者的预后具有至关重要的作用。 高迁移率族蛋白B1（HMGB1）是存在于真核生物细胞中的非组蛋白染色体结合蛋白，可以增强肿瘤抗原与树突状细胞的传递，促进肿瘤新生血管形成，减慢肿瘤细胞的凋亡速度[3]。一些研究发现，HMGB1 与肿瘤发生、发展及细胞浸润、转移密切相关[4-5]。 该研究通过回顾性分析2020年1月—2021年1月期间菏泽市立医院97 例NSCLC 患者的临床资料，探讨HMGB1 在NSCLC 患者中的表达与临床意义， 旨在为该病的诊疗方案提供可靠的参考与借鉴。 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析菏泽市立医院97 例NSCLC 患者的临床资料，其中男58 例，女39 例；年龄42～79 岁，平均（60.54±7.52）岁；肿瘤直径0.5～6.8 cm，平均（3.20±1.52）cm；组织学类型为鳞癌52 例，腺癌45 例；分化程度为低分化32 例，中分化35 例，高分化30 例；原发肿瘤局部-淋巴结-远处转移（TNM） 分期为Ⅰ期20 例，Ⅱ期27 例，Ⅲ期39 例，Ⅳ期11 例；有淋巴结转移52 例，有血管浸润53 例。纳入标准：符合《中华医学会肺癌临床诊疗指南(2019 版)》[6]中对于NSCLC的诊断标准，且经病理检查证实；肺癌术中切除的肺癌组织与癌旁组织完整；首次诊断为NSCLC；预计生存期>3 个月。 排除标准：有放化疗治疗史；合并其他恶性肿瘤； 严重心脑血管疾病与其他器官功能性障碍；免疫系统与血液系统疾病；患有急性或慢性感染性疾病；资料不全。 此外，所有患者或其家属对该次研究知情同意； 该次研究方案取得菏泽市立医院伦理委员会的批准。

1.2 方法

选取患者术中切除的肺癌组织与癌旁组织，采用免疫组化法检测HMGB1 的表达情况， 具体方法如下：①免疫组化。通过福尔马林对患者的肿瘤组织进行固定，以梯度乙醇脱水，并在石蜡中包埋，蜡处理后形成连续切片。 选取切片，烘烤60 min 后由二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡，用100%、95%、80%、70%梯度酒精水化，再经自来冲洗5 min，上述操作重复2 次。滴加3%医用双氧水，避光孵育10 min，由磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗3 次，30 min/次。 在枸橼酸钠缓冲液中浸泡， 以高压锅给予抗原热修复。 封闭在山羊血清中15 min。 通过滤纸将血清吸除， 滴加已稀释完的一抗，在4℃环境中过夜，室温下放置60 min，经PBS冲洗操作2 次，5 min/次，加入生物素化二抗，环境温度37℃，反应20 min，经PBS 冲洗操作2 次，5 min/次，滴加辣根酶标记生物素试剂+链霉卵白素，在环境温度37℃下静置20 min，PBS 冲洗操作2 次，5 min/次。 二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木素溶液复染，时间为10 min， 予以酒精分化处理。 用80%、95%、100%、100%梯度酒精脱水，经二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明处理，适量加入中性树胶，封片晾干。②评价结果。由两名病理学专家进行结果评价， 以随机方式在每个切片中选取8 个视野，400 倍高倍镜下观察，HMGB1通常在肿瘤细胞中着色为褐色细颗粒。 阳性细胞表达率[7]≥30%为阳性，<30%为阴性。

1.3 观察指标

①比较NSCLC 患者肺癌组织与癌旁组织的HMGB1 表达情况与阳性率； ②分析NSCLC 患者肺癌组织中HMGB1 表达与临床病理特征 （性别、年龄、肿瘤直径、组织学类型、分化程度、TNM 分期、淋巴结转移情况、血管浸润）的关系；③针对NSCLC 患者肺癌组织中HMGB1 阳性表达的临床病理特征进行Logistic 回归分析。

1.4 统计方法

采用SPSS 23.0 统计学软件进行数据分析，计数资料采用[n(%)]表示，组间比较进行χ2检验，影响因素进行多因素Logistic 回归分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NSCLC 患者肺癌组织与癌旁组织的HMGB1表达情况对比

NSCLC 患者肺癌组织的HMGB1 阳性率高于癌旁组织阳性率，差异有统计学意义（P＜0.001），见表1。

表1 NSCLC 患者肺癌组织与癌旁组织的HMGB1 表达情况对比[n（%）]

2.2 HMGB1 在肺癌组织与癌旁组织中的表达情况

HMGB1 主要在NSCLC 患者细胞的胞核与胞质中表达，呈淡黄色或褐色，少量表达于癌旁细胞中，见图1。

图1 HMGB1 在肺癌组织与癌旁组织中的表达

2.3 NSCLC 患者肺癌组织中HMGB1 表达与临床病理特征关系

该组NSCLC 患者中分化程度为低分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移患者的HMGB1 阳性率显著高于分化程度为中高分化、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。 不同性别、年龄、肿瘤直径、组织学类型与血管浸润患者的HMGB1 阳性率对比差异无统计学意义 （P＞0.05），见表2。

表2 NSCLC 患者肺癌组织中HMGB1 表达与临床病理特征的关系[n（%）]

2.4 影响NSCLC 患者肺癌组织中HMGB1 阳性表达的临床病理特征Logistic 回归分析

经多因素Logistic 回归分析发现，分化程度为低分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、 有淋巴结转移是影响NSCLC 患者肺癌组织中HMGB1 阳性表达的独立危险因素（P＜0.05），见表3。

表3 影响NSCLC 患者肺癌组织中HMGB1 阳性表达的临床病理特征Logistic 回归分析

3 讨论

NSCLC 是肺癌的主要类型，约占所有肺癌患者的80%，包括大细胞癌、腺癌、鳞癌，其癌细胞较小细胞癌生长分裂更为缓慢[8-9]。 然而，早期NSCLC 缺少典型性，往往在出现浸润、局部生长，压迫组织引起特异性症状后才被发现， 此时多数患者已步入中晚期，失去了最佳治疗机会[10]。 目前，生物学技术发展迅速，肿瘤分子标志物对于NSCLC 的诊断价值也得到了临床的广泛关注[11]。 探寻一种与NSCLC 相关的分子标志物，及时且准确诊断患者的病情，对于改善预后具有重要的意义。

HMGB1 是在哺乳动物细胞中广泛分布的高度保守核蛋白， 同时也是高迁移率族蛋白家族中的重要成员，当细胞核中HMGB1 结合于DNA 后可以参与DNA 的修饰与转录， 而由单核-巨噬细胞、 粒细胞、 淋巴细胞等免疫细胞形成的HMGB1 能够参与炎症反应[12]。 有研究发现，HMGB1 结合于特异性细胞膜受体后利于肿瘤细胞的浸润、增殖与转移[13]。 目前，临床已发现HMGB1 在甲状腺癌、结肠癌与前列腺癌组织中呈过表达现象[14]。 冯为[15]对90 例肺癌患者应用免疫组化HMGB1 检测， 发现肺癌组织HMGB1 阳性表达率63.33%显著高于癌旁组织的30.00%（P＜0.05）。该文研究结果与上述结果相近，该组NSCLC 患者肺癌组织的HMGB1 阳性率（81.44%）高于癌旁组织阳性率 （25.77%）（P＜0.001）。 同时，HMGB1 主要在NSCLC 患者细胞的胞核与胞质中表达，呈淡黄色或褐色，少量表达于癌旁细胞中。结果说明，HMGB1 在NSCLC 患者肺癌组织中呈高表达状态，究其原因可能与NSCLC 细胞转移与进展时血管生长迅速， 而在血管生长期间能够与正常细胞产生营养竞争，正常细胞因缺少营养物质而死亡，细胞死亡后被动分泌出HMGB1 有关，继而导致肺癌组织内HMGB1 明显升高，而癌旁细胞中呈少量表达[16]。孔丽蕊等[17]对确诊的81 例NSCLC 患者进行HMGB1检测发现，TNM 临床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移患者中HMGB1 阳性率93.18%、89.80%高于Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移患者的64.86%、31.25%。 该文研究发现，该组NSCLC 患者中分化程度为低分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移患者的HMGB1 阳性率为93.75%、94.00%、96.15%，显著高于分化程度为中高分化、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、 无淋巴结转移患者的75.38%、68.09%、64.44%（P＜0.05）。 同时， 经多因素Logistic 回归分析发现， 分化程度为低分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、 有淋巴结转移是影响NSCLC 患者肺癌组织中HMGB1 阳性表达的独立危险因素（P＜0.05）。结果说明，HMGB1 与NSCLC 患者的病理特征及预后具有密切的相关性， 即患者病情越重，HMGB1 阳性率越高， 究其原因可能为HMGB1 可以提高组织纤溶原激活物活性，增强肿瘤细胞的侵袭能力，同时HMGB1 结合于相关配体糖基化终产物受体后进一步增强了细胞外基质降解作用， 继而促进肿瘤发生转移[18]。

综上所述，HMGB1 在NSCLC 中呈高表达，在肺癌组织中的阳性表达与分化程度、TNM 分期、 淋巴结转移情况有关，对于NSCLC 诊断与预后具有一定的指导意义。