常用兔耳草类药材的6种有效成分含量对比研究

高必兴，何 芳，齐景梁，苟 琰，耿 昭，钟 恋，蒋桂华，周 娟，蒋运斌

常用兔耳草类药材的6种有效成分含量对比研究

高必兴1, 2，何 芳2，齐景梁2，苟 琰1, 2，耿 昭2，钟 恋1, 2，蒋桂华1*，周 娟2，蒋运斌3*

1.成都中医药大学药学院，四川 成都 610072 2.四川省药品检验研究院国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，四川 成都 611731 3.西南大学药学院中医药学院，重庆 北碚 400715

建立测定兔耳草类药材主要有效成分苯丙素苷类（毛蕊花糖苷、松果菊苷、大车前苷及鞭打绣球苷B）及环烯醚萜苷类（10----methoxycinnamoyl-catalpol及10--[()-3,4-dimethoxycinnamoyl]-catalpol）的HPLC-PDA含量测定方法，并比较不同基原兔耳草的含量差异，为其质量控制方法及临床有效性提供依据。采用资生堂SPOLAR C18（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相为乙腈-0.4%甲酸溶液，梯度洗脱；体积流量1.0 mL/min；检测波长为325 nm；柱温为30 ℃；进样量为10 μL。依据测定结果使用聚类分析法和偏最小二乘法判别分析（orthogonal partial least squares discrimination analysis，OPLS-DA）法进行分析。在此条件下，34批全缘兔耳草、21批短筒兔耳草、10批圆穗兔耳草、6批革叶兔耳草、5批短穗兔耳草及4批紫叶兔耳草的6种有效成分的色谱峰分离度均良好，线性关系良好。不同基原所含的主要有效成分类型及含量均不一致，有共性也有差异性。运用SIMCA 14.1和SPSS 25.0软件分析结果显示，短筒兔耳草与圆穗兔耳草聚为一类，紫叶兔耳草与短穗兔耳草聚为一类，内在组成及含量差异小；全缘兔耳草不同产区差异大，革叶兔耳草组间差异最大。建立的含量测定分析方法能有效地对多种基原兔耳草进行分析，能有效地对其进行质量控制；通过比较不同基原的兔耳草，为兔耳草资源的开发及利用提供有效依据。

全缘兔耳草；短筒兔耳草；圆穗兔耳草；革叶兔耳草；短穗兔耳草；紫叶兔耳草；苯丙素苷类；环烯醚萜苷类；毛蕊花糖苷；松果菊苷；大车前苷；鞭打绣球苷B；HPLC-PDA

兔耳草为常用藏药，始载于《月王药诊》[1]，音译名为“洪连”[2]。主要分布于甘肃省、青海省、云南省、四川省及西藏自治区。于《四部医典》[3]列为藏草药之首，药用价值极高。具有清热、解毒、利湿、平肝、行血、调经等作用。可用于发热烦渴、肺热咳嗽、头痛眩晕、湿热黄疸、月经不调、药食中毒等症[2]。我国现存兔耳草属植物有17种，多分布于西南高山，部分可药用[4]。不同地区使用的兔耳草药用基原不一样，大部分基原可作“洪连”使用，其中有一种基原“短穗兔耳草”作藏药“直打瓦曾”使用，在藏区主要用于治疗“黄水病”[5]。

前期调研发现，市售及临床使用的兔耳草为兔耳草属多种植物，以短筒兔耳草Maxim、全缘兔耳草W.W.Smith、圆穗兔耳草Batalin、短穗兔耳草Maxim.及革叶兔耳草W.W.Smith等使用居多，但仅有短筒兔耳草、全缘兔耳草及革叶兔耳草有标准收载[6-7]，同时仅有短筒兔耳草收载于《中国药典》2020年版一部中，以松果菊苷为对照品规定含量测定，其他基原均无含量测定的相关研究。据文献报道，苯丙素苷类及环烯醚萜苷类成分为玄参科兔耳草属植物的主要活性成分，具有明显的药理活性[8-10]。本实验经前期研究发现，兔耳草类药材中苯丙素苷类成分以毛蕊花糖苷、松果菊苷、大车前苷、鞭打绣球苷B居多，环烯醚萜苷类成分以10----metho-xycinnamoyl- catalpol及10--[()-3,4-dimetho-xycinnamoyl]- catalpol居多[11]，故针对此6种成分进行含量测定，并比较不同植物之间的成分差异，为兔耳草资源的合理开发、市场的规范发展及临床的正确使用提供科学的依据。

1 仪器及试药

日本岛津LC-20AD高效液相色谱仪，PDA检测器；资生堂SPOLAR C18（250 mm×4.6 mm，5 µm）；德国Sartorious BP211D型十万分之一电子天平；Milli-Q超纯水机。

对照品毛蕊花糖苷（批号111530-201512，质量分数为96.7%）、松果菊苷（批号111670-201907，质量分数为91.8%）、大车前苷（批号111914-201604，质量分数为90.2%）均购自中国食品药品检定研究院。鞭打绣球苷B（质量分数为99.6%），10----metho- xycinnamoyl-catalpol（质量分数为99.0%），10--[()-3,4-dimetho-xycinnamoyl]- catalpol（质量分数为99.0%），均为实验室分离纯化的对照品；甲醇和乙腈为色谱纯（Fisher公司）；水为Milli-Q纯化水。

34批全缘兔耳草W.W.Smith、21批短筒兔耳草Maxim.、10批圆穗兔耳草Batalin、6批革叶兔耳草W.W.Smith、5批短穗兔耳草Maxim.及4批紫叶兔耳草W.W.Smith均经四川省药品检验检测院黎跃成主任中药师鉴定为基原准确的药材。具体样品信息见表1。

2 方法与结果

2.1 含量测定方法

2.1.1 色谱条件与系统适用性 色谱柱：资生堂 SPOLAR C18（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：乙腈（A）-0.4%甲酸溶液（B）梯度洗脱（0～20 min，14% A；20～35 min，14%～17% A，35～60 min，17%～20% A；60～70 min，20%～14% A；体积流量1.0 mL/min；检测波长325 nm；柱温30 ℃；进样量10 μL。色谱图见图1。

2.1.2 对照品溶液的制备 取毛蕊花糖苷、大车前苷、松果菊苷、鞭打绣球苷B、10----methoxycinnamoyl-catalpol及10--[()-3, 4-dimethoxycinnamoyl]-catalpol对照品适量，精密称定，加70%甲醇分别制成质量浓度均为0.1 mg/mL的对照品溶液。

表1 样品信息

Table 1 Sample information

编号基原采集地编号基原采集地 QY-1全缘兔耳草四川省甘孜州石渠县DG-7短筒兔耳草青海省某供应商 QY-2全缘兔耳草四川省甘孜州德格藏医院DG-8短筒兔耳草甘肃省武夷天柱县旦马乡 QY-3全缘兔耳草四川省甘孜州宗萨县DG-9短筒兔耳草青海省八一路药材市场 QY-4全缘兔耳草甘孜州藏医院DG-10短筒兔耳草青海省藏医院（2018采收） QY-5全缘兔耳草宇妥藏药DG-11短筒兔耳草青海省藏医院（2019采收） QY-6全缘兔耳草西藏自治区藏药厂DG-12短筒兔耳草泽库县藏医院 QY-7全缘兔耳草西藏奇正藏药DG-13短筒兔耳草青海省海南州藏医院 QY-8全缘兔耳草金珂藏药DG-14短筒兔耳草青海三智商贸有限公司 QY-9全缘兔耳草西藏诺迪康药业有限公司DG-15短筒兔耳草湟中县藏医院 QY-10全缘兔耳草青海省八一路药材市场DG-16短筒兔耳草果洛州藏医院 QY-11全缘兔耳草西藏药检所DG-17短筒兔耳草移多藏药 QY-12全缘兔耳草四川省甘孜州石渠县城关五村DG-18短筒兔耳草西藏奇正药业 QY-13全缘兔耳草居麦旁藏药DG-19短筒兔耳草色达县藏医院 QY-14全缘兔耳草云南药检所DG-20短筒兔耳草荷花池药材市场（产地西藏） QY-15全缘兔耳草西藏自治区DG-21短筒兔耳草青海省贵南县马营镇直亥雪山 QY-16全缘兔耳草甘孜州藏医院YS-1圆穗兔耳草四川省甘孜州石渠县 QY-17全缘兔耳草青海省八一路药材市场（2017）YS-2圆穗兔耳草德格藏医院 QY-18全缘兔耳草青海省八一路药材市场（2020）YS-3圆穗兔耳草宗萨藏医院 QY-19全缘兔耳草青海省黄南州藏医院YS-4圆穗兔耳草四川省阿坝州壤塘县中壤塘乡中壤塘村 QY-20全缘兔耳草四川省甘孜州稻城海子山垭口YS-5圆穗兔耳草四川省阿坝若尔盖藏医院 QY-21全缘兔耳草四川省甘孜州理塘县藏坝乡YS-6圆穗兔耳草湟中县藏医院 QY-22全缘兔耳草四川省甘孜州理塘县兔耳山垭口YS-7圆穗兔耳草阿坝药检所 QY-23全缘兔耳草四川省甘孜州理塘县德巫乡YS-8圆穗兔耳草青海优润堂商贸有限责任公司（2017） QY-24全缘兔耳草四川省甘孜州理塘县拉波乡拉美村YS-9圆穗兔耳草青海优润堂商贸有限责任公司（2019） QY-25全缘兔耳草四川省甘孜州乡城县藏医院YS-10圆穗兔耳草小金县美沃乡 QY-26全缘兔耳草玉树藏族自治州藏医院GY-1革叶兔耳草西藏错那雷达站 QY-27全缘兔耳草甘南州藏医院GY-2革叶兔耳草四川阿坝年宝叶则 QY-28全缘兔耳草囊谦县藏医院GY-3革叶兔耳草红原藏医院 QY-29全缘兔耳草理塘藏医院GY-4革叶兔耳草西藏山南市错那县波拉山 QY-30全缘兔耳草西藏拉萨蓝屋石药材公司GY-5革叶兔耳草拉萨市当雄县羊八井镇雪古拉山 QY-31全缘兔耳草得荣藏医院GY-6革叶兔耳草云南迪庆州白马雪山第二垭口 QY-32全缘兔耳草西藏藏医学院藏药有限公司DS-1短穗兔耳草藏瀚阁 QY-33全缘兔耳草凉山州木里藏族自治县中藏医院DS-2短穗兔耳草青海省海晏县三联村 QY-34全缘兔耳草雅江县雅江县柯拉山上DS-3短穗兔耳草西藏医学院 DG-1短筒兔耳草马尔康藏医院DS-4短穗兔耳草青海省八一路药材市场 DG-2短筒兔耳草仁青藏药行DS-5短穗兔耳草迪庆州藏医院 DG-3短筒兔耳草青海省果洛州ZY-1紫叶兔耳草四川省甘孜州理塘县拉波乡拉德村 DG-4短筒兔耳草青海省西宁市大通回族土族自治县ZY-2紫叶兔耳草四川阿坝藏医院 DG-5短筒兔耳草青海省门源回族自治县岗什卡雪峰ZY-3紫叶兔耳草云南迪庆州白马雪山 DG-6短筒兔耳草青海省大东树山ZY-4紫叶兔耳草甘孜州巴塘县禾尼乡山上

1-松果菊苷 2-大车前苷 3-毛蕊花糖苷 4-鞭打绣球苷B 5-10-O-trans-p-methoxycinnamoyl-catalpol 6-10-O-[(E)-3,4-dimethoxycinnamoyl]- catalpol

2.1.3 供试品溶液的制备 取上述样品粉末（过三号筛）约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 方法学考察

2.2.1 线性关系 分别精密吸取“2.1.2”项下的混合对照品储备溶液0.25、0.5、1.0、2.0、2.5、5.0、10 mL置10 mL的量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。按“2.1.1”项色谱条件下进样分析，记录其峰面积。以峰面积为纵坐标（），其质量浓度为横坐标（），绘制标准曲线，6种成分线性关系良好（R≥0.999 8）。各成分标准曲线的回归方程、线性范围及相关系数见表2。

表2 各被测成分的标准曲线方程、线性范围和相关系数

Table 2 Calibration curve, linear range, correlation coefficient of each component

成分回归方程线性范围/(μg·mL−1)R2 松果菊苷Y＝9 220.6 X＋34 201.32.882 5～115.300 00.999 8 大车前苷Y＝14 700.3 X＋28 163.13.087 5～123.500 00.999 9 毛蕊花糖苷Y＝13 677.2 X－101 358.12.987 5～119.500 00.999 8 hemiphroside BY＝13 958.6 X＋3 408.52.762 5～110.500 01.000 0 10-O-trans-p-methoxycinnamoyl-catalpolY＝18 785.4 X－5 173.93.012 5～120.500 00.999 9 10-O-[(E)-3,4-dimethoxycinnamoyl]-catalpolY＝17 757.5 X－2 081.42.888 5～115.400 00.999 9

2.2.2 检测限与定量限测定 取“2.1.2”项下对照品混合溶液用70%甲醇逐级稀释后进样测定，以色谱图中信噪比（/）3∶1为检测限，/10∶1为定量限。结果表明，各成分检测限为2.8～10.6 ng，定量限为9.3～34.9 ng，灵敏度高。

2.2.3 精密度试验 精密吸取“2.1.2”项下对照品混合溶液10 μL，连续进样6次，记录峰面积。结果毛蕊花糖苷、大车前苷、松果菊苷、鞭打绣球苷B、10----methoxycinnamoyl-catalpol、10-- [()- 3,4-dimethoxycinnamoyl]-catalpol的峰面积的RSD分别为0.14%、0.21%、0.31%、0.34%、0.42%及0.21%，表明仪器精密度良好。

2.2.4 重复性试验 取样品粉末（QY-1）6份，分别按照“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱方法测定，记录峰面积，计算含量。结果各份供试品溶液的毛蕊花糖苷、大车前苷、松果菊苷、鞭打绣球苷B、10----methoxycinnamoyl-catalpol、10--[()-3,4-dimetho- xycinnamoyl]-catalpol的质量分数的RSD分别为0.89%、1.21%、0.82%、0.82%、0.76%及0.94%。

2.2.5 稳定性试验 取同一份供试品溶液（QY-1），分别于0、2、4、8、12、24 h进样测定。结果毛蕊花糖苷、大车前苷、松果菊苷、鞭打绣球苷B、10----methoxycinnamoyl- catalpol、10--[()-3,4-dimethoxycinnamoyl]-catalpol的峰面积的RSD分别为0.45%、1.01%、0.73%、0.97%、0.84%及0.74%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.2.6 加样回收率试验 分别取松果菊苷和毛蕊花糖苷适量，精密称定，置量瓶中，加70%甲醇溶解配制成质量浓度分别为1.040 2、1.016 6 mg/mL的对照品溶液。取已测定的供试品粉末（YS-1）6份，每份各约0.05 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入上述2种对照品溶液贮备液各1.0 mL。另分别取大车前苷、鞭打绣球苷B、10----methoxycinnamoyl-catalpol、10-- [()-3,4- dimetho xycinnamoyl]-catalpol适量，精密称定，置量瓶中，加70%甲醇溶解配制成质量浓度分别为1.011 2、0.301 2、0.511 5、0.253 8 mg/mL的对照品溶液。取已测定的供试品粉末（QY-1）6份，每份各约0.05 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入上述2种对照品溶液储备液各1.0 mL。按照“2.1.3”项下方法平行制备供试品溶液，进样分析，计算回收率，表明该方法加样回收率试验结果良好。松果菊苷、毛蕊花糖苷、大车前苷、鞭打绣球苷B、10----metho-xycinnamoyl- catalpol、10--[()-3,4-dimetho-xycinnamoyl]-catalpol的回收率分别为97.5%、99.9%、99.8%、99.2%、101.3%及100.3%，RSD分别为0.90%、2.11%、2.49%、1.38%、1.48%及0.95%。

2.2.7 样品含量测定 称取样品兔耳草粉末（过3号筛）0.1 g，精密称定，分别按照“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱方法测定，记录6种成分的峰面积，计算含量。结果见表3。

表3 样品测定结果(n＝3)

Table 3 Results of samples determination (n＝3)

编号质量分数/% 松果菊苷大车前苷毛蕊花糖苷鞭打绣球苷B10-O-trans-p-metho-xycinnamoyl-catalpol10-O-[(E)-3,4-dimetho-xycinnamoyl]-catalpol苯丙素苷类环烯醚萜苷类 QY-1/2.47/0.471.090.492.941.58 QY-2/2.48/0.880.680.273.360.95 QY-3/3.19/1.302.520.274.492.79 QY-4/1.00/0.170.010.011.170.02 QY-5/2.78/1.770.440.154.550.59 QY-6/1.47/2.520.110.053.990.16 QY-7/3.10/1.121.381.014.222.39 QY-8/2.88/1.720.850.114.600.96 QY-9/2.88/1.720.850.114.600.96 QY-10/2.21/1.770.120.033.980.15 QY-11/5.89/0.822.671.516.714.18 QY-12/1.78/0.210.410.151.990.56 QY-13/3.34/0.881.230.594.221.82 QY-14/2.80/0.680.800.153.480.95 QY-15/2.90/1.990.180.044.890.22 QY-16/1.87/0.280.010.012.150.02 QY-17/2.11/1.830.120.033.940.15 QY-18/3.42/2.111.620.485.532.10 QY-19/3.38/1.423.110.364.803.47 QY-20/2.19/0.190.030.012.380.04 QY-21/7.70/0.200.060.017.900.07 QY-22/5.72/1.550.010.017.270.02 QY-23/5.76/0.640.040.016.400.05 QY-24/6.13/0.330.060.016.460.07 QY-25/2.29/0.940.170.043.230.21 QY-26/1.77/1.340.070.013.110.08

续表3

编号质量分数/% 松果菊苷大车前苷毛蕊花糖苷鞭打绣球苷B10-O-trans-p-metho-xycinnamoyl-catalpol10-O-[(E)-3,4-dimetho-xycinnamoyl]-catalpol苯丙素苷类环烯醚萜苷类 QY-27/1.59/0.410.610.022.000.63 QY-28/4.98/0.900.160.045.880.20 QY-29/4.61/0.423.520.265.033.78 QY-30/2.54/3.180.290.085.720.37 QY-31/4.19/1.231.570.105.421.67 QY-32/3.57/0.160.180.013.730.19 QY-33/3.01/1.101.981.104.113.08 QY-34/3.22/0.240.020.013.460.03 均值/3.27/1.070.790.224.341.02 DG-11.060.110.48///1.65/ DG-21.160.010.79///1.96/ DG-30.860.080.85///1.79/ DG-40.700.100.63///1.43/ DG-50.730.090.45///1.27/ DG-61.150.210.45///1.81/ DG-71.640.051.45///3.14/ DG-81.050.150.55///1.75/ DG-90.600.050.43///1.08/ DG-101.490.160.71///2.36/ DG-111.480.020.68///2.18/ DG-121.260.031.19///2.48/ DG-131.720.050.98///2.75/ DG-141.380.130.76///2.27/ DG-151.000.190.84///2.03/ DG-161.710.150.94///2.80/ DG-171.190.010.66///1.86/ DG-182.040.041.65///3.73/ DG-191.850.150.85///2.85/ DG-201.170.021.15///2.34/ DG-211.200.040.97///2.21/ 均值1.260.090.83///2.18/ YS-11.310.121.35///2.78/ YS-20.960.130.74///1.83/ YS-31.350.251.11///2.71/ YS-40.930.221.17///2.32/ YS-51.610.212.53///4.35/ YS-60.650.370.63///1.65/ YS-71.190.011.22///2.42/ YS-81.250.210.70///2.16/ YS-91.110.490.87///2.47/ YS-100.860.112.05///3.02/ 均值1.120.211.24///2.57/ GY-1/2.77/0.880.382.773.653.15 GY-2/1.44/0.050.051.441.491.49 GY-3/2.37/0.800.212.373.172.58 GY-4/1.17/0.373.801.171.544.97 GY-5/2.09/1.950.042.094.042.13 GY-6/4.84/0.030.054.844.874.89 均值/2.45/0.680.762.453.133.20 DS-1/0.840.400.010.840.401.251.24 DS-2/0.930.040.080.930.041.050.97 DS-3/1.250.240.021.250.241.511.49 DS-4/0.630.280.030.630.280.940.91 DS-5/0.750.110.140.750.111.000.86 均值/0.880.210.060.880.211.151.09 ZY-1/2.15/0.05//2.20/ ZY-2/0.33/0.07//0.40/ ZY-3/0.31/0.11//0.42/ ZY-4/0.24/0.10//0.34/ 均值

2.2.8 聚类分析（hierarchical clustering alg，HCA） 采用SPSS 25.0统计软件进行HCA分析，选用组内联接聚类法，以欧式平方距离度量标准，数据统计分析。当欧式平方距离为2.5时，短筒兔耳草与圆穗兔耳草聚成了一类，紫叶兔耳草与短穗兔耳草聚成了一类；当欧式平方距离为10时，大部分全缘兔耳草与革叶兔耳草聚成了一类，剩下的全缘兔耳草单独聚成了一类，此类全缘兔耳草实地采样均是来源于甘孜州理塘周边区域，稻城，巴塘等区域，植物形态上与西藏所产兔耳草存在着一定的差异，说明其种内存在着一定的差异。

2.2.9 偏最小二乘法判别分析（orthogonal partial least squares discrimination analysis，OPLS-DA）法 采用SIMCA 14.1统计软件，先对数据进行分类识别，进行OPLS-DA分析，采用无监督模式识别方法观察样品的自然聚集，结果见图2。结果表明短筒兔耳草与圆穗兔耳草相互聚集，可与其他4种兔耳草明显的区分；紫叶兔耳草与短穗兔耳草聚集，革叶兔耳草不同样品间分散，组间差异大；全缘兔耳草大部分相互聚集，不同样品间存在一定差异，与HCA结果大体一致。

图2 不同基原兔耳草的OPLS-DA得分图

3 讨论

本研究针对色谱条件与系统适用性及供试品溶液的制备进行了考察。色谱柱的考察了资生堂SPOLAR C18（250 mm×4.6 mm，5 µm），Waters X-Bridge C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）及Hypersil GOLD C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），最终以资生堂SPOLAR C18（250 mm×4.6 mm，5 µm）分离度最佳；检测波长在190～700 nm进行紫外-可见光全波长扫描，发现检测波长在325 nm时各色谱峰的峰面积最高；流动相系统及比例针对了乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.2%甲酸溶液、乙腈-0.4%甲酸溶液、乙腈-0.5%甲酸溶液及乙腈-0.2%磷酸溶液，最终以乙腈（A）-0.4%甲酸溶液梯度洗脱分离效果最佳。供试品溶液的制备针对了样品的提取溶剂，提取方法及料液比进行了考察，最终以“2.1.3”项所述方法为最佳。

据相关文献与标准记载，兔耳草于藏区主要用于清肝胆热，用于治疗热性肝病[2,12]等，本实验所测成分均为其活性成分。结果表明，不同基原兔耳草含有此6种成分的种类及含量具有共性及差异性：首先在种类方面，全缘兔耳草主要含有苯丙素苷类成分（大车前苷及鞭打绣球苷B）与环烯醚萜苷类（10----methoxycinnamoyl-catalpol及10--[()-3,4-dimethoxycinnamoyl]-catalpol），无毛蕊花糖苷及松果菊苷；革叶兔耳草与全缘兔耳草相似，含有此4类成分；短穗兔耳草除此4类成分外，还含有少量的松果菊苷。短筒兔耳草主要含有苯丙素苷类成分（毛蕊花糖苷、大车前苷及松果菊苷），无上述环烯醚萜苷类成分。圆穗兔耳草同短筒兔耳草。紫叶兔耳草含有大车前苷及少量的鞭打绣球苷B。其次在含量方面，单体成分平均含量方面，大车前苷：全缘兔耳草（3.27%）＞革叶兔耳草（2.28%）＞短穗（0.88%）＞紫叶（0.76%）＞圆穗（0.21%）＞短筒（0.09%）；松果菊苷：短筒（1.26%）＞圆穗（1.12%）；毛蕊花糖苷：圆穗（1.24%）＞短筒（0.83%）＞短穗（0.21%）；鞭打绣球苷B：全缘（1.07%）＞革叶（0.68%）＞紫叶（0.08%）＞短穗（0.06%）。10---- methoxycinnamoyl-catalpol：短穗（0.88%）＞全缘（0.79%）＞革叶（0.76%）；10--[()-3,4- dimethoxycinnamoyl]- catalpol：革叶（2.45%）＞全缘（0.22%）＞短穗（0.21%）。大类成分的总量方面，苯丙素苷类：全缘（4.34%）＞革叶（3.13%）＞圆穗（2.57%）＞短筒（2.18%）＞短穗（1.15%）＞紫叶（0.84%），环烯醚萜苷类：革叶（3.20%）＞短穗（1.09%）＞全缘（1.02%）。

通过上述实验结果同时说明，不同基原兔耳草所含成分的种类及含量很多不一致，作同一药材使用有待商榷；HCA分析及OPLS-DA法分析结果表明圆穗兔耳草与短筒兔耳草明显的聚成了一类，互相聚集，2种内在化学组成与含量相似，圆穗兔耳草与短筒兔耳草同属于“雄洪连”[11]，此研究结果表明短筒兔耳草与圆穗兔耳草在成分的种类及含量上具有很大的相似性，而圆穗兔耳草未被现行国家和地方标准收载，但在市场及临床有一定的应用基础，与短筒兔耳草等同入药，并取得了相应的临床疗效，以缓解当前短筒兔耳草资源紧缺的问题。而全缘兔耳草所含成分的种类和含量与短筒兔耳草有很大的差异，从大类成分的含量来看，无论从苯丙素苷类还是环烯醚萜苷类成分全缘兔耳草的含量均大于短筒兔耳草，前期通过调研及本草文献考证发现，圆穗兔耳草与短筒兔耳草同属于“雄洪连”，全缘兔耳草属“雌洪连”，雄洪连的临床疗效优于雌洪连[13]，短筒兔耳草优于全缘兔耳草有待进一步的研究。

现有标准中，《中国药典》2020年版[2]洪连（基原：短筒兔耳草）中收载的以松果菊苷（苯丙素苷类成分）作为对照品进行含量测定。全缘兔耳草作为药材“兔耳草”的基原收载于《部颁藏药材》标准[6]，但无含量测定项，革叶兔耳草作为药材“兔耳草”的基原收载于《云南省药品标准》（1996）[7]中，但无含量测定项。圆穗兔耳草、紫叶兔耳草及短穗兔耳草则未有相关标准收载；本研究针对其有效成分进行研究，也为不同基原兔耳草质量标准的建立和提高打下基础。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Comparation study on contents of six active ingredients of

GAO Bi-xing1, 2, HE Fang1, QI Jing-liang2, GOU Yan1, 2, GENG Zhao2, ZHONG Lian1, 2, JIANG Gui-hua1, ZHOU Juan2, JIANG Yun-bin3

1.School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China 2.Sichuan Institute for Drug Control/Key Laboratory of Quality Evaluation of Chinese Patent Medicines, NMPA, Chengdu 611731, China 3.College of Pharmaceutical Sciences and Chinese Medicine, Southwest University, Chongqing 400715, China

HPLC-PDA content determination method was established to determinate the main active ingredients of Honglian (), which included phenylpropanoid glycosides (verproside, echinacoside, plantamajoside, hemiphroside B) and iridoid glycosides (10----methoxycinnamoyl-catalpol and 10--[()-3,4-dimethoxycinnamoyl]-catalpol and compared with the other primitive species, so as to provide evidence for quality control methods and clinical effectiveness.The HPLC analysis was performed on SPOLAR C18(250 mm × 4.6 mm, 5µm), using acetonitrile and 0.4% formic acid solution as the mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min, the detection wave-length was 325 nm and column temperature was 30 ℃ with 10 μL injection volume.The combined determination results were analyzed using partial least squares discriminant analysis (OPLS-DA) and cluster analysis.Under this condition, the chromatographic peak resolution of the six active ingredients had good separationin in 34 batches of，21 batches of, 10 batches of, six batches of, five batches ofMaxim.and four batches of.The six ingredients had a good linear relationship.The types and contents of the main active ingredients contained in different bases were all inconsistent, with commonalities and differences.The results analyzed by SPSS 25.0 and SIMCA 14.1 software showed thatandwere clustered,andwere clustered together, and there were large difference in different producing areas of,andthe difference between groups ofwas the greatest .The established content determination and analysis method could effectively analyze a variety ofand could effectively control its quality.By comparing the species from different origins, it provided an effective basis for the development and utilization of its resources.

W.W.Smith;Maxim;Batalin;W.W.Smith;Maxim;W.W.Smith.; phenylpropanoid glycosides; iridoid glycosides; verproside; echinacoside; plantagoside; hemiphroside B; HPLC-PDA

R286.2

A

0253 - 2670(2022)09 - 2810 - 08

2021-09-06

国家食药监总局药化司专项“特色民族药材检验方法示范性研究”；国家重点研发计划子课题（2019YFC1712302）；成都中医药大学杏林学者项目（XSGG2019023）；成都中医药大学杏林学者项目（QNXZ2019024）

高必兴，男，博士研究生，研究方向为中药及民族药质量研究。Tel: (028)87877141 E-mail: laughgao@foxmail.com

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.09.025

通信作者：蒋桂华，女，教授，博士生导师。Tel: 18980923782 E-mail:11469413@qq.com

蒋运斌，男，讲师，研究方向为民族药学，Tel: 13368082556 E-mail: yunbinjiang@swu.edu.cn

[责任编辑 时圣明]