不同生长年限对三七主根中总皂苷及浸出物含量的影响

蒋腾川，王艳林，洪影雯，冯晓林，王海燕，李 娅，魏富刚，梁云飞

［1.广西中恒创新医药研究有限公司，广西 南宁 530000；2.文山苗乡三七科技有限公司，云南 文山 663000；3.广西梧州制药（集团）股份有限公司，广西 梧州 543002］

三七来源于五加科植物三七Panax notoginseng（Burk.）F. H. Chen 的干燥根和根茎，具有散瘀止血、消肿定痛的功效，是多种中药制剂的主要药物，包括注射用血栓通（冻干）、注射用血塞通（冻干）、血塞通软胶囊、血栓通胶囊等，在心脑血管疾病、呼吸系统疾病、泌尿系统疾病、消化系统疾病等的治疗中发挥着重要作用［1］。《中华人民共和国药典》中规定三七于秋季花开前采挖，但未明确三七的采收年限［2］。三七的主要有效成分为三七总皂苷，不同生长年限对三七总皂苷的含量有影响，目前大部分研究以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1的含量作为HPLC 法测定的评价指标［3-7］。有文献报道三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rd、Re、Rb1这5 种皂苷的含量约占三七总皂苷的80%［8］，且《中华人民共和国药典》也以这5 种皂苷单体作为评价三七总皂苷质量标准的指标。因此，本研究采用HPLC 法测定不同产地不同年限三七主根中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rd、Re、Rb15 种皂苷成分的含量，采用热浸法测定三七主根中浸出物的含量，旨为选择三七适宜的采收年限提供实验依据。

1 实验材料

1.1 仪器 XPE-204 型电子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司）；HNY-500 型超声波清洗机（广州市华南超声设备有限公司）；DFT-500C 型摇摆式高速粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；GZX-9420-MBE 型电热恒温鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；Milli-Q Ⅱ超纯水仪（美国 Millipore 公司）；U3000-1型高效液相色谱仪（赛默飞世尔科技公司）。

1.2 试药 对照品：三七皂苷R1（批号：110745-201921；纯度 90.4%）、人参皂苷 Rg1（批号：110703-201933；纯度 93.4%）、人参皂苷 Rd（批号：111818-201603；纯度 92.1%）、人参皂苷 Re（批号：110754-201827；纯度 93.4%）、人参皂苷 Rb1（批号：110704-201827；纯度91.2%），以上对照品均购自中国食品药品检定研究院；乙腈（色谱纯，DiKMA）；甲醇（分析纯，西陇科学股份有限公司）。

1.3 三七样品 2019 年10 月至2020 年1 月于传统三七采收期采集7 个不同产区1～3 年生三七样品，每批样品采集鲜品（三七地下部分）5 kg，修剪、清洗、干燥后取三七主根粉碎。21 批三七样品均鉴定为五加科植物三七Panax notoginseng（Burk.）F. H.Chen，均来源于三七规范化种植基地，样品的采集信息见表1。

表1 三七样品采集信息

序号13 14 15 16 17 18 19 20 21产地红河建水红河弥勒昆明石林生长年限一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生批号HHJS-SQ-20191117-1 HHJS-SQ-20191117-2 HHJS-SQ-20191117-3 HHML-SQ-20191117-1 HHML-SQ-20191117-2 HHML-SQ-20191117-3 KMSL-SQ-20191117-1 KMSL-SQ-20191117-2 KMSL-SQ-20191117-3采集日期2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17 2019.11.17

2 方法与结果

2.1 总皂苷含量测定

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re 和人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml 含三七皂苷R10.3 mg、人参皂苷Rg11.2 mg、人参皂苷Rd 0.3 mg、人参皂苷Re 0.3 mg 和人参皂苷Rb11.0 mg的混合溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 取三七主根粉末（过四号筛），每份约1 g，精密称定，精密加入70%甲醇25 ml，称定重量。超声处理30 min，放冷至室温，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀静置，取上清液，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。

2.1.3 色谱条件 色谱柱为IntersilC8-3（4.6 mm×250 mm，5µm）；以乙腈为流动相A，水为流动相B 进行梯度洗脱，洗脱程序见表2；检测波长为203 nm，流速1.5 ml/min，进样量10µl。空白对照、单体混合对照品、供试品的色谱图见图1。

表2 流动相洗脱程序

图1 三七HPLC色谱图

2.1.4 皂苷的含量测定结果 见图2、表3。

图2 不同生长年限三七主根总皂苷含量

表3 结果显示：7 个产地三七主根总皂苷含量均为三年生＞二年生＞一年生，且均有显著性差异（P＜0.01）。表明在三年种植期限内，随着生长年限的增加，三七主根的总皂苷含量呈现增高的趋势，且与种植年限呈正相关。

表3 不同生长年限三七主根皂的苷含量测定结果 （，n=3）

表3 不同生长年限三七主根皂的苷含量测定结果 （，n=3）

注：与同产地一年生比较，①P＜0.01；与同产地二年生比较，②P＜0.01

序号R1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0产地曲靖富源曲靖宣威文山麻栗坡11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21文山丘北红河建水红河弥勒昆明石林生长年限一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生0.173 0.430 0.933 0.192 0.530 0.99 0.229 0.365 0.609 0.267 0.791 1.064 0.213 0.685 0.820 0.169 0.843 0.831 0.179 0.657 0.912 Rg1 0.875 1.814 3.321 0.761 2.072 3.166 1.395 2.464 3.505 1.704 3.612 4.214 1.419 3.408 3.526 1.157 2.983 3.770 0.899 2.863 3.664 Re 0.098 0.214 0.366 0.116 0.225 0.418 0.287 0.436 0.703 0.224 0.527 0.590 0.268 0.504 0.377 0.151 0.445 0.710 0.113 0.370 0.489 Rb1 0.510 1.405 2.663 0.370 1.192 2.650 0.870 2.455 2.750 1.001 2.766 3.643 0.862 2.338 2.616 0.770 2.627 3.413 0.470 2.048 2.636 Rd 0.084 0.284 0.680 0.050 0.270 0.641 0.156 0.591 0.745 0.173 0.766 0.787 0.133 0.585 0.488 0.096 0.593 0.902 0.072 0.435 0.624总皂苷含量（%）1.738±0.005 4.144±0.006①7.962±0.001①②1.488±0.003 4.287±0.002①7.869±0.003①②2.936±0.007 6.309±0.001①8.311±0.007①②3.367±0.016 8.461±0.002①10.296±0.008①②2.895±0.016 7.518±0.002①7.827±0.008①②2.342±0.003 7.489±0.007①9.624±0.082①②1.730±0.009 6.372±0.005①8.324±0.017①②

2.2 浸出物的含量测定 参考《中华人民共和国药典》2015 年版（通则2201）项下的热浸法测定，用甲醇作为溶剂。取供试品约2.0 g，精密称定，置于100 ml的锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，静置1 h 后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1 h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用干燥过滤器滤过，精密量取滤液25 ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量，以干燥品计算供试品中甲醇溶性浸出物的含量（%）。7个产区共21批样品的浸出物含量测定结果见图3及表4。

表4 不同生长年限三七主根浸出物的含量测定结果 （，n=3）

表4 不同生长年限三七主根浸出物的含量测定结果 （，n=3）

注：与同产地一年生比较，①P＜0.01；与同产地二年生比较，②P＜0.01

序号1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0产地曲靖富源产地红河建水曲靖宣威红河弥勒文山麻栗坡序号13 14 15 16 17 18 19 20 21昆明石林生长年限一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生浸出物含量（%）10.04±0.11 11.09±0.07①16.43±0.01①②15.84±0.11 16.86±0.06①18.09±0.02①②10.04±0.01 15.39±0.02①17.06±0.02①②20.47±0.10 21.70±0.07①26.00±0.06①②生长年限一年生二年生三年生一年生二年生三年生一年生二年生三年生浸出物含量（%）12.51±0.03 19.62±0.17①20.67±0.06①②15.02±0.09 21.31±0.15①18.97±0.05①②13.05±0.05 20.94±0.02①20.98±0.08①11 12文山丘北

图3 不同生长年限三七主根浸出物含量

表4 结果显示：曲靖富源、曲靖宣威、文山麻栗坡、红河建水和文山丘北的主根浸出物含量均为三年生≥二年生＞一年生，浸出物含量与生长年限呈正相关（P＜0.01）；昆明石林为三年生≥二年生＞一年生，红河弥勒为二年生＞三年生＞一年生。总的来说，多数产地的三七主根浸出物含量为三年生＞二年生＞一年生，即随着生长年限的增加，三七主根浸出物含量增高。

2.3 三七总皂苷含量聚类分析 以7 个产地不同生长年限三七主根的总皂苷含量为变量进行聚类分析，结果见图4。当距离为10 时，根据三七总皂苷含量可将不同三七主根分为2类，第Ⅰ类由一年生和二年生组成，第Ⅱ类由二年生和三年生组成。

图4 不同生长年限三七主根总皂苷含量聚类树状图

3 结 论

中药材的采收是否合理，直接影响着药材的质量。为避免因产地、采收时间不同而对三七主根中总皂苷成分的含量造成差异，本实验选取了7 个不同产区的三七样品作为研究对象，同一产区内选择在相同采收期从规范化的三七种植基地统一采收、加工三七样品。从测定结果分析得知：不同生长年限三七主根总皂苷含量为三年生＞二年生＞一年生；不同生长年限三七主根浸出物含量中，多数为三年生＞二年生＞一年生，个别产区存在二年生＞三年生＞一年生的情况。

总体上看，在三年种植期限内，随着生长年限的增加，三七主根的总皂苷含量和浸出物含量呈现增高的趋势。因此建议人工种植三七应三年后采挖，这也与传统的三七采收期一致。