血清纤维胶凝蛋白3对急性脑梗死病人出血转化的预测价值

刘慧纯，刘群会，贾 敏，李文静

出血转化(hemorrhagic transformation，HT)是临床较为常见的急性脑梗死(acute cerebral infarction，ACI)病人梗死继发性出血，是ACI严重并发症之一，可使病情进一步加重，因此，早期评估ACI病人发生HT的风险具有重大意义[1]。目前，HT病理机制虽尚未完全明确，其发病可能与再灌注损伤、氧化应激、血管反应、基质金属蛋白酶(matrix metallo proteinases，MMP)、炎症反应等因素损伤血脑屏障(blood-brain barrier，BBB)及红细胞溢出相关[2-3]。纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)属于纤维蛋白胶凝素(Ficolin)家族，主要表达于肺及肝脏，可影响补体系统，激活炎症反应[4]。有关研究显示，Ficolin-3在创伤性脑损伤中表达下调，其可一定程度反映疾病严重程度，Ficolin-3可能是诊断、预后评估创伤性脑损伤引起继发性脑损伤的潜在标志物[5]。但Ficolin-3是否可作为ACI病人发生HT的预测指标鲜有文献报道。基于此，本研究分析ACI病人血清Ficolin-3水平，评估其对HT的预测价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2015年8月—2019年12月我院收治的156例ACI病人。ACI诊断标准：参考《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2014》[6]有关ACI判定标准进行诊断。纳入标准：①符合ACI诊断标准；②为首次发病，且在发病24 h内住院；③临床病例资料完整。排除标准：①近期有外伤、外科大手术者；②合并深静脉血栓形成、脓毒血症者；③合并恶性肿瘤、慢性阻塞性肺病、严重肝肾功能不全者；④合并系统性红斑狼疮等免疫系统疾病者。

收集两组病人年龄、性别、高血压、糖尿病、高血脂、心房颤动、收缩压、舒张压、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白等临床资料。所有病人家属均签署知情同意书，本研究符合《世界医学会赫尔辛基宣言》有关要求，获得本院伦理委员会批准后进行。

1.2 主要试剂与仪器 Ficolin-3酶联免疫吸附剂法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒(货号：ZN2180)购于北京百奥莱博科技有限公司；基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)ELISA试剂盒(货号：111010)购于广州蕊特生物科技有限公司；白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)ELISA试剂盒(货号：FK-R0049)购于上海延慕实业有限公司。酶标仪(型号：AMR-100)购于杭州奥盛仪器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 样本收集 收集所有病人发病24 h内外周静脉血3～4 mL，静置25～35 min，室温条件下以4 200 r/min离心8 min，分离血清，于-80 ℃冰箱中保存，备用。

1.3.2 ELISA法检测血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平 从-80 ℃冰箱中取出适量冻存血清样本，解冻，严格按照Ficolin-3、MMP-9、IL-6试剂盒说明书检测两组血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平。

2 结 果

2.1 两组一般资料比较 将156例ACI病人分为HT组(33例)和非HT组(123例)，病人首次影像学检查未发现脑出血，于发病14 d内复查头颅CT，显示低密度区内高密度影为HT。与非HT组相比，HT组糖尿病比例、心房颤动比例、三酰甘油、低密度脂蛋白水平均明显升高(P<0.05)。详见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2 两组血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平比较 与非HT组相比，HT组血清Ficolin-3水平明显降低(P<0.05)，MMP-9、IL-6水平均明显升高(P<0.05)。详见表2。

表2 两组血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平比较 (±s)

2.3 HT病人血清Ficolin-3水平与MMP-9、IL-6的相关性 Pearson法分析显示，HT病人血清Ficolin-3水平与MMP-9、IL-6均呈负相关(r=-0.462，P<0.05；r=-0.543，P<0.05)。详见图1、图2。

图1 HT病人血清Ficolin-3水平与MMP-9的相关性

图2 HT病人血清Ficolin-3水平与IL-6的相关性

2.4 血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平对HT的预测价值 以MMP-9、IL-6为对照，评估血清Ficolin-3对HT的预测价值，ROC曲线显示，血清Ficolin-3、MMP-9诊断HT的曲线下面积(area under curve，AUC)分别为0.867，0.840，诊断价值较高，当血清Ficolin-3水平<13.78 μg/mL时，其诊断HT的灵敏度为84.8%，特异度为79.7%，诊断效能高于IL-6。血清Ficolin-3与MMP-9联合检测HT 的AUC为0.935，特异度明显提高。详见表3、图3。

表3 各项指标对HT的诊断效能

图3 血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6诊断HT的ROC曲线

2.5 ACI病人发生HT的影响因素分析 以ACI病人是否发生HT为因变量，以糖尿病、心房颤动、三酰甘油、低密度脂蛋白、Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平为自变量，进行Logistic回归分析，结果显示，糖尿病、心房颤动、MMP-9、IL-6是ACI病人发生HT的危险因素(P<0.05)，Ficolin-3是ACI病人发生HT的保护因素(P<0.05)。详见表4。

表4 Logistic回归分析ACI病人发生HT的影响因素

3 讨 论

ACI是神经内科常见危重急症之一，具有起病急、发病率及致死率高的特点[7]。HT是ACI常见并发症，可引发致死性脑出血，预后较差[8]。因此，寻找可早期评估ACI发生HT风险的指标，及时监测并干预，是临床防治HT及改善病人预后的关键。本研究显示，HT组病人糖尿病比例、心房颤动比例、三酰甘油、低密度脂蛋白水平均明显高于非HT组，提示三酰甘油、低密度脂蛋白水平升高，合并糖尿病/心房颤动可能会增加ACI病人发生HT风险。

Ficolin-3是由FCN3基因编码，可介导细胞凋亡、识别糖类、调理吞噬等过程，并在灭活补体系统的凝集素途径中起重要作用，且Ficolin-3水平降低伴随着补体激活增加，与各类急慢性神经病变性疾病的炎症反应密切相关[9-10]。杨永康等[5]发现Ficolin介导的补体凝集素途径的激活可促进创伤性脑外伤补体依赖性炎症反应过程，且其激活与脑损伤后的炎症损伤及继发性出血相关，Ficolin-3为Ficolin家族重要成员之一，在严重颅脑外伤病人血清中呈低水平表达，与格拉斯哥昏迷量表评分具有一定相关性，其有望成为评估病人病情及预后的生物学指标[11]。以上研究表明，异常水平的Ficolin-3与神经类疾病及HT关系密切。本研究中HT组病人血清Ficolin-3水平明显低于非HT组，提示Ficolin-3可能参与并影响HT病理发展过程。推测，低水平Ficolin-3通过激活补体凝集素途径，加重炎症反应，进而在HT发生发展中起一定作用，但其具体机制有待深入研究证实。

MMP-9是MMP家族成员之一，参与机体免疫调节，与动脉粥样硬化不稳定斑块、神经功能缺损、炎症反应有关[12-13]。研究发现，MMP-9在缺血性脑卒中疾病中表达水平明显升高，其可降解血管外基质成分，损坏BBB，破坏细胞与基质间的微环境，引发神经细胞凋亡，导致神经功能性障碍，与缺血性脑卒中的发生、HT密切有关，MMP-9对急性缺血性脑卒中后的HT有较高预测价值[14]；另外，IL-6等炎性因子可促进MMP-9合成及炎症细胞迁移，释放更多炎性因子，引起血管损伤，使炎症细胞从血管内渗入神经组织，促使神经细胞坏死及脑组织发生HT[15-16]。本研究中HT组病人血清MMP-9、IL-6均明显高于非HT组，提示MMP-9、IL-6均可能与HT疾病进展相关。究其原因，MMP-9、IL-6可能通过影响BBB及炎症反应等，从而在HT病情进展中起重要作用。

本研究中HT病人血清Ficolin-3水平与MMP-9、IL-6均呈负相关，提示Ficolin-3可能与MMP-9、IL-6相互影响，从而共同影响HT发生发展，但仍需进一步探究其机制。本研究显示，血清Ficolin-3诊断HT的AUC为0.867，当血清Ficolin-3水平<13.78 μg/mL时，ACI病人继发HT的风险率较高，提示Ficolin-3对ACI病人继发HT有一定诊断价值，且其诊断效能高于MMP-9、IL-6，血清Ficolin-3有望成为诊断ACI病人继发HT的潜在标志物。为更好地诊断ACI病人发生HT，本研究采用Ficolin-3与MMP-9联合诊断ACI病人继发HT的风险，结果显示，血清Ficolin-3、MMP-9联合预测ACI病人继发HT的AUC为0.935，灵敏度、特异度分别为82.0%、93.5%，提示血清Ficolin-3与MMP-9联合预测ACI病人继发HT的价值高于Ficolin-3，MMP-9可一定程度提高诊断ACI病人继发HT的特异度，可更好地筛选ACI继发HT病人。进一步研究显示，糖尿病、心房颤动、MMP-9、IL-6是ACI病人发生HT的危险因素，Ficolin-3是ACI病人发生HT的保护因素，提示血清MMP-9、IL-6水平升高，Ficolin-3水平降低，患有糖尿病、心房颤动均可能会增加ACI病人继发HT的风险，及时监测血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平有助于早期评估ACI病人发生HT的风险。

综上所述，ACI并发HT病人血清Ficolin-3水平明显下调，其可能与MMP-9、IL-6相互作用，进而参与HT发展，Ficolin-3联合MMP-9有助于准确诊断HT病人。但本研究选取样本较少，后期将增加样本量进行更为深入的研究。