BRA V600E 抗体的几种手工免疫组化染色方法在甲状腺乳头状癌中的表达情况比较＊

廖子龙 张培荣 吴 泽

1.深圳市盐田区人民医院病理科 (广东 深圳 518000)

2.中南大学湘雅医院病理科 (湖南 长沙 410008)

BRAF基因是一种原癌基因，BRAFV600E位点突变导致细胞恶性增殖，从而促进肿瘤的发生发展。近年来学者发现BRAFV600E突变与甲状腺乳头状癌发病密切相关[1]。通过BRAF V600E基因检测与HE染色技术发现，BRAFV600E在甲状腺乳头状癌患者中的突变比例达90%[2]。而BRAFV600E抗体是一种鼠单克隆抗体(克隆VE1)，是针对BRAF突变氨基酸序列(氨基酸596到606 GLATEKSRWSG)的人工合成肽。全部实体瘤中约有8%可检出BRAFV600E突变，其中包括39%的乳头状甲状腺癌[3]。该抗体在免疫组化病理层面的临床应用有着重要的意义；特别在只能手工免疫组化染色的医疗单位，为其提供一项具有操作较为简单、费用低等优点的方法，也将给患者提供更有效的诊断证明和检查项目的选择。实验方法如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取甲状腺乳头状癌肿瘤标本，其中BRAFV600E在肿瘤细胞中强阳性表达的组织5例，采用相同的高压修复方式和同一批号的罗氏一抗试剂。以二抗滴加HRP30min设为实验组1，滴加ES(反应放大剂+高敏型酶标抗小鼠/兔IgG聚合物)并根据放大剂和聚合物的不同作用时间设为实验组2～8，分别为实验组2(放大剂15min+聚合物15min)、实验组3(放大剂30min+聚合物15min)、实验组4(放大剂60min+聚合物15min)，实验组5(放大剂30min+聚合物20min)，实验组6(放大剂30min+聚合物30min)，实验组7(放大剂30min+聚合物45min)，实验组8(放大剂30min+聚合物60min)，以使用全自动免疫组化仪配套罗氏试剂染色设立对照组；在相同条件下同时进行染色。

1.2 切片前期处理常规切片(厚3～4μm)，电热恒温箱65°C烤片2h以上，二甲苯脱蜡10min×3－无水酒精2min×2－95%酒精1min－90%酒精1min－80%酒精1min－水洗。……