猪瘟病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验检测方法的建立

朱海侠 陈 雷 查代灿 张惠云 胡晓涵 包松英

（兆丰华生物科技（福州）有限公司 福州 350014）

猪瘟（Classical swine fever，CSF）是由猪瘟病毒（CSFV）引起的猪和野猪高接触性、高致病性的传染病[1]，给我国养猪业造成巨大经济损失。该病一年四季均可发生，但以春、夏等多雨季节多发。不同日龄、不同品种的家猪和野猪对猪瘟病毒均易感。该病被世界动物卫生组织列为A类烈性传染病，被我国农业部列为一类传染病，是目前阻碍我国养猪业健康发展的首要动物传染病[2]。疫苗免疫接种是防控该病的主要措施，猪瘟大流行现状已经得到根除，但仍存在区域性、点状散发性流行[3]。究其原因，猪瘟疫苗的抗原含量是影响猪群免疫效果的重要因素之一。

目前针对猪瘟病毒的检测主要有RT-PCR检测技术、荧光定量PCR检测方法、LAMP方法、免疫荧光技术（IFA）、兔体定型热反应等。PCR相关技术主要针对的是病毒核酸，因此，在弱毒疫苗的评定过程中很难准确确定其活病毒的含量。由于猪瘟病毒感染细胞后不产生细胞病变，其病毒含量的测定主要依赖于传统的免疫荧光技术或兔体定型热反应进行判定。兔体定型热反应作为一种检测猪瘟弱毒疫苗效价的传统方法，受大兔个体差异影响较大，且耗时较长，费用较高。IFA检测方法是目前检测CSFV的一种重要的辅助方法，但该方法对设备要求较高，不利于推广应用。

免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA），其主要原理是通过抗原抗体的相互作用，产生特异性显色反应，通过光学显微镜肉眼即可观察并判定结果[4]。……