核内不均一性核糖核蛋白H2抑制流感病毒复制机制初步研究

王苗利，薛瑞雪，张 月，蔺晓月，李玉杰，邢林林，孔祥华，王贵升

（山东省动物疫病预防与控制中心，山东 济南 250100）

流感病毒（Influenza virus）属于正粘病毒科流感病毒属，病毒结构由内而外分为核芯、基质蛋白和囊膜三个部分，基因组包含8个分节段的单股负链RNA（ss-RNA）。流感病毒的基因组RNA（vRNA）与核蛋白（NP）结合，并与RNA聚合酶复合体缠绕成致密的核糖核蛋白复合体（RNPs），以异源三聚复合体的形式存在于感染宿主的细胞核内，主要参与病毒RNA的合成。流感病毒感染的宿主范围十分广泛，包括人和其他哺乳动物、禽类、鸟类等。

不均一性核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein，hnRNP）是细胞核内的一类RNA结合蛋白，包括约30个高丰度表达的成员，这类蛋白可与新合成的不均一性RNAs（hnRNAs/pre-mRNAs）的内含子区域结合来协助完成内含子的剪切，并在mRNA从细胞核转运至细胞质的过程中结合mRNA来稳定mRNA结构。

本研究前期发现hnRNP H2蛋白能够抑制流感病毒复制，为进一步探究hnRNP H2是否会抑制流感病毒复制及相关机制，本研究采用双荧光素酶活性试验、免疫共沉淀试验等方法进行相关研究分析。

1 材料与方法

表1 引物序列

1.1 病毒株、细胞及质粒毒株A/WSN/1933(H1N1)、293T细胞系、犬肾上皮细胞系MDCK由本试验室保存；含有流感病毒聚合酶识别序列的萤火虫荧光素酶报告基因质粒（LUC）和含有CMV启动子序列的海肾萤光素酶报告基因质粒（RENILLA）由本实验室构建；pCMV-N-Flag载体、pCAGGS载体购自Novagen公司。

1.2 主要试剂兔抗beta Actin、Flag、hnRNP H2多抗和鼠抗A型流感病毒NP、M1、M2、PB1、PB2、PA多抗均购自ThermoFisher公司；T7 RNA体外转录试剂盒均购自Invitrogen公司；RNA提取试剂盒和质粒提试剂盒购自QIAGEN公司；……