玻璃珠-涡旋振荡改良法用于硅藻DNA 提取

蔡杰，王博，胡孙林，曲一泓，宋涛，陈建华，邓建强

1.海南医学院法医学教研室 海南省热带法医学司法鉴定工程研究中心，海南 海口 571199；2.深圳美恩美科技有限公司，广东 深圳 518103

水中尸体的鉴定一直是法医学领域关注的问题之一，其中生前溺水与死后抛尸入水的鉴别依然是当前所面对的重要难题[1]，传统依赖尸体征象的病理学检验特异性有限且受死亡时间、尸体腐败等条件影响大，因此，针对水中尸体组织器官中硅藻含量的检验，目前被认为是辅助溺死鉴定的“金标准”[2]。硅藻的检验主要分为形态学方法及分子生物学方法，其中形态学检验会受生物发育阶段和遗传可变的影响而产生变异，且硅藻种类过多，基于形态学的硅藻鉴定难度较大[3]；而硅藻分子生物学检验方法具有无需硝酸消化、检验速度快、分类不依赖形态学特征，灵敏度、特异性和检出率更高，并可有效减少外来污染的影响，可依靠基因组数据库进行结果数据分析，如在人体器官中检出硅藻，是判断生前溺死的重要依据[4-7]。硅藻分子检验中，由于硅藻结构的特殊性[如硅藻细胞外覆主要成分为二氧化硅（SiO2）的硅质细胞壁]，一般认为普通DNA 提取试剂盒无法破坏硅藻坚硬的硅质外壳[8-9]，因此硅藻DNA 提取比较困难。同时，从人体组织中提取硅藻成分目前主要用于法医学实践，应用局限，因而不受试剂盒开发商关注，且其提取会受到人体组织的干扰，比水样硅藻DNA 提取的难度更大。因此，目前市面上针对法医学鉴定的硅藻提取试剂盒较少，多选用土壤DNA 提取试剂盒作为法医学硅藻DNA 检验的标准技术方案，也有采用植物DNA 提取试剂盒[10-12]。……