干扰素-γ消除肿瘤相关成纤维细胞介导非小细胞肺癌细胞辐射抵抗的实验研究

韩若臻 项林敏 邱恩毅 董事 翁欣然 胡呈呈 陈恩乐

肺癌位居恶性肿瘤相关死亡率第一位，其中非小细胞肺癌占肺癌总数约80%[1-2]。放疗已成为治疗肺癌的重要手段之一，但部分患者对放疗抵抗，甚至出现放疗后肿瘤进展[3]。肿瘤基质对肿瘤细胞发生、发展和治疗抵抗起到支持作用，而肿瘤基质中肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts,CAFs）为肿瘤组织中主要成分之一 ，后者对肿瘤细胞起到保护作用，诱导肿瘤细胞产生对治疗抵抗，同时促进肿瘤发生转移[4-5]。此外，电离辐射可诱导CD8+T细胞浸润于肿瘤组织中，而肿瘤微环境中CD8+T细胞丰度与肿瘤患者预后呈正相关[6]。CD8+T细胞能在杀伤肿瘤细胞的同时释放干扰素-γ，干扰素-γ通过作用于CAFs来减少谷胱甘肽（glutathione,GSH）和半胱氨酸释放，进而消除其介导的化疗耐药作用[7]。但干扰素-γ能否通过这一途径来消除CAFs对辐射后肿瘤细胞的保护作用，对此，本研究观察了干扰素-γ消除CAFs介导的非小细胞肺癌细胞辐射抵抗的效果，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 人肺腺癌细胞系A549、人肺鳞癌细胞系H460购自中科院上海细胞库。DMEM全培养基、10%FBS、青霉素、链霉素购自美国Thermo Fisher公司。细胞蛋白抽提试剂盒和聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）快速制备试剂盒、人FAP-PE流式抗体购自美国Bio-Rad公司。CCK-8试剂盒、半胱氨酸标准品、胱氨酸标准品、GSH检测试剂盒、GSH合成酶抑制剂（丁硫氨酸-亚砜亚胺，BSO）购自上海碧云天生物技术有限公司。Transwell小室购自美国Corning公司。流式抗体 CD105-APC、CD44-APC、EPCAM-FITC、Annexin-V-FITC、PI、CD45-APC 购自美国 eBioscience公司。DNA损伤修复蛋白γH2AX、胱氨酸转运蛋白xCT抗体、信号传导及转录激活蛋白1（STAT1）抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔二抗均购自英国Abcam公司。……