基于MALDI-TOF MS鉴别产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的应用研究

岑坷 斯怡莎 裘春宁 徐丽慧 陈琼 吴旻 吴盛海

肠杆菌目细菌是引起医院感染与社区感染的主要病原微生物[1-2]，其中大肠埃希菌是导致尿路感染和血流感染的常见病原菌。随着广谱抗生素的滥用，产超广谱 β-内酰胺酶（extended spectrum β-lactamases,ESBLs）肠杆菌目细菌逐渐增多，使得临床能够选用的抗生素越来越有限，给临床治疗带来一定难度[3-5]。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）是一种可靠的细菌和真菌鉴定方法[6-7]，具有准确、廉价、高通量和周转时间短等特点，并可用于细菌耐药性分析与分型，如区分肺炎链球菌几种常见血清型[8]，快速鉴别甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌与耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌[9]。笔者采用仪器法检测细菌耐药表型，再对产ESBLs菌株扩增16S rRNA目的片段并进一步测序区分其基因型别，同时采用MALDI-TOF MS收集质谱峰图，通过建模和验证，探讨MALDI-TOF MS在肠杆菌目产ESBLs菌株基因型别鉴定中的价值，现将结果报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 收集2019年1至12月浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院各类无污染体液标本（脓液、血液、胆汁、穿刺液、胸腹水等）中分离培养的肠杆菌目菌株共368株，置20%甘油肉汤中，-80℃冰箱冷冻保存备用。

1.2 仪器和试剂 VITEKⅡ Compact及其配套的

GN-AST药敏卡（批号：1130774103）、MH 平板（批号：1007209400）、哥伦比亚血琼脂平板（批号：1006923520）（法国生物梅里埃公司）；抗生素纸片亚胺培南（10 μg）和美罗培南（10 μg）（美国 OXOID 公司）；MALDI-TOF MS质谱仪及其配套的质谱样品处理基质溶液（α-氰基-4羟基肉桂酸）与分析软件（德国布鲁克公司）。PCR扩增仪C1000型、凝胶成像仪Gel Doc XR型、电泳仪及水平电泳系统（美国伯乐公司）。……