王攀琦,张 蒙,刘 洋,刘星吟,董 兰,魏瑶璐,宁志丰,刘复兴**
(1.湖北科技学院医学部药学院,湖北 咸宁 437100;2.湖北科技学院医学部基础医学院)
皮肤鳞癌又称表皮样癌,是一类起源于表皮或附属角质形成细胞的恶性肿瘤,在皮肤癌发病率中占第二位[1]。同时皮肤鳞癌具有很强的侵袭和转移能力,一部分患者在治疗后仍会出现复发和耐药情况,严重影响着患者的生活质量。黄腐酚(xanthohumol)是一种从啤酒花提取的天然化合物,具有广泛的生物活性,如抗炎、抗氧化、抗癌、抗菌和降脂等[2]。研究发现,黄腐酚对肝癌、前列腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、结肠癌、胃癌等多种癌症均具有治疗效果[3],但目前尚无黄腐酚对皮肤鳞癌的药理作用研究。因此,我们通过体外细胞实验来探讨不同浓度的黄腐酚对人皮肤鳞癌的抑制作用,为黄腐酚治疗皮肤鳞癌在临床上的应用提供实验依据。
人皮肤鳞癌A431细胞(湖南丰晖生物),DMEM高糖培养基(Gibco公司),胎牛血清(FBS,Procell公司),胰酶(Biosharp公司),Transwell小室(Corning公司),二甲基亚砜(DMSO,Sigma公司),基质胶(Corning公司),细胞凋亡与坏死检测试剂盒(碧云天公司),一抗稀释液(碧云天公司),GAPDH、JAK2、STAT3、Bcl-2(ABclonal公司),黄腐酚购置于上海源叶生物科技有限公司(HPLC检测纯度在98%以上)。
1.2.1 细胞培养
将人皮肤鳞癌A431细胞株常规培养在含10%胎牛血清和1%青霉素链霉素的DMEM高糖培养基,置于37℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中培养,取对数生长期细胞生长状态良好的细胞进行实验。所有实验均重复3次。
1.2.2 细胞增殖能力检测
收集对数生长期的A431细胞,调整浓度为5 000个/孔接种在96孔板中,每组设置6个平行。……