人醛缩酶A在大肠杆菌中的表达及纯化

金科华，刘倩倩，向念慈

(1.湖北科技学院医学部医药研究院，湖北 咸宁 437100；2.湖北科技学院医学部基础医学院)

多数肿瘤细胞即便在氧气供应充足的条件下，依然进行旺盛的糖酵解，为其提供能量和合成生物分子的原料，这一特点称为有氧糖酵解或瓦伯格效应[1]。抑制肿瘤细胞的糖酵解途径是极有潜力的抗肿瘤策略[2-4]。醛缩酶A(aldolase 1，ALDOA)是糖酵解途径的重要酶之一，催化1，6-二磷酸果糖裂解为3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮。Tang等[5]发现ALDOA的高表达与肝癌的转移与不良预后密切相关；Li等[6]发现ALDOA通过促进糖酵解，加速肝内胆管癌的增值；Tu等[7]体外研究发现过表达ALDOA促进肺癌转移性克隆形成；也有研究[6，8-9]发现抑制ALDOA的活性可降低肿瘤细胞生长速度。本研究旨在利用基因工程在大肠杆菌中表达ALDOA，为发现ALDOA的抑制剂和酶学研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

大肠杆菌[Top10及BL21(DE3)]、DNA marker为北京全式金生物技术公司产品。ALDOA cDNA由厦门大学生命科学学院韩家淮院士馈赠。卡那霉素、IPTG、质粒抽提试剂盒、凝胶回收试剂盒为生工生物工程(上海)股份有限公司产品。限制性核酸内切酶为NEB公司产品。Pyrobest DNA Polymerase、DNA连接试剂盒为TaKaRa公司产品。His-Tag蛋白纯化试剂盒(可溶性)购自康为世纪生物科技有限公司。BCA蛋白质定量测定试剂盒为Bio-sharp公司产品。截流分子量10kd超滤管(15mL)为Millipore公司产品。

1.2 扩增ALDOA cDNA

据ALDOA cDNA序列，用Snapgene软件设计扩增引物。上游引物F：CGACATATGATGGCCGCCTACAAACTGG；下游引物R：AGTCTCGAGT-CACTTCTTGGCCTTGCCC。序列的前三个是保护碱基，下划线处分别为Nde I和Xho I位点。引物委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成。……