SSR 标记荧光毛细管电泳在种子检测中常见问题分析

李巧英

（山西省种业发展中心，太原 030006）

分子标记技术是近年来发展较快的基因检测技术，随着新标记方法的开发和试验技术的改进，在基因水平上检测农作物种子信息逐渐成为监控种子质量的一个重要手段。由于分子标记法不受自然条件和表现性状的约束，实现了种子品种遗传信息室内快速检测，受到大家的青睐。SSR 作为第2 代分子标记方法，是一种共显性标记，具有重复性好、等位变异多、数据分析简便、易操作等优点，在农作物种子质量检测中被广泛使用。

荧光毛细管电泳技术将荧光检测的高灵敏度和毛细管电泳的高效性结合，利用电泳和电渗流的电动力学原理，在毛细管中灌满胶分离PCR 产物，检测荧光信号，数据软件分析系统将其转化成峰图，显示试验结果。该技术自动化程度高，检测通量高，试验操作简单，数据统计程序化，避免人为估算的主观性，结果精确到1bp[1]，直接显示扩增产物片段的大小，实现了指纹图谱与碱基序列长短之间的对应转换，易于实验室间结果比对，常用GeneMapper和GeneMarker 分析SSR 扩增片段[2]。本文就试验中遇到的荧光信号强度、特异峰型的统计分析以及毛细管电泳仪运行和维护、试验结果与数据库比对等问题进行分析，为SSR 分子标记荧光毛细管电泳检测农作物种子质量试验技术标准化提供参考。

1 均一荧光信号采集的保证

SSR 分子标记荧光毛细管电泳采集荧光信号作为试验数据的基础，严格要求模板DNA 浓度和扩增体系的配置比例，避免不同样品孔间荧光信号强弱差异大带来干扰。……