不同豆制品中大豆异黄酮的种类和含量分析

刘李婷，石 菲，刘 叶，陈姗姗

（陕西省产品质量监督检验研究院农副食品所，陕西西安 710048）

异黄酮是黄酮类化合物中的一种，主要存在于豆科植物中，其中大豆中的含量最高，故特别称为大豆异黄酮[1]。大豆异黄酮是强力的抗氧化物，能够降低自由基对于低密度脂蛋白的氧化，降低低密度脂蛋白—胆固醇在动脉中沉积，减少动脉硬化的风险；能有效地预防和抑制白血病、骨质疏松、结肠癌、肺癌、胃癌、乳腺癌和前列腺癌等多种疾病的发生，尤其是对乳腺癌和前列腺癌有积极的预防和治疗作用[2]。国内有关大豆异黄酮检测方法的研究已有很多，包括分光光度法[3]、液相色谱法[4]、医学免疫法和色谱-质谱联用法[5]等。由于不同豆制品的成分均较复杂，大豆异黄酮组分含量会随着实际生产环境和制作工艺发生相互转化，本研究建立了一种快速简便、灵敏度高的高效液相色谱法，用于检测不同豆制品中大豆异黄酮的含量，并比较不同豆制品中大豆异黄酮的种类。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

固体类：豆腐乳、豆瓣酱、豆腐、豆芽、豆干、豆皮、腐竹和辣条；液体类：大豆油、豆乳、豆浆、酱油；不同豆类：扁豆、黑豆、黄豆、红小豆和豇豆，所用样品均为市售常见样品。

试剂：甲醇（色谱纯）；二甲基亚砜（色谱纯）；正己烷（色谱纯）；磷酸（分析纯）；大豆苷标准品；大豆素标准品；大豆黄苷标准品；大豆黄素标准品；染料木苷标准品；染料木素标准品。

1.2 仪器与设备

高效液相色谱仪（岛津SPD-20A）；超声波清洗仪（昆山市超声仪器KQ-500E）；离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；酸度计[梅特勒-托利名仪器（上海）有限公司F2系列]。

1.3 实验方法

1.3.1 样品前处理

（1）固体。精密称取固体样品2.0 g，加5 mL正己烷超声脱脂10 min，再加10 mL 80%甲醇溶液溶解至50 mL离心管，超声萃取10 min，离心机离心（8 000 r/min，3 min），取有机层用0.45 μm有机滤膜过滤，HPLC分析含量。

（2）液体。移液枪精密吸取液体样品2.0 mL于50 mL离心管中，加5 mL正己烷超声脱脂10 min，再加10 mL 80%甲醇溶液溶解至50 mL离心管，超声萃取10 min，离心机离心（8 000 r/min，3 min），取有机层用0.45 μm有机滤膜过滤，HPLC分析含量。

1.3.2 仪器条件

色谱柱：C18ODS-3（5 μm，4.6 mm×250 mm）；柱温：30 ℃；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为磷酸水溶液（pH=3）；梯度洗脱，如表1所示；流速：1.0 mL/min检测波长：260 nm。

表1 流动相比例

1.3.3 标准溶液配制

精密称取干燥的大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆黄素、大豆素和染料木素各4 mg，用二甲基亚砜溶液定容至10 mL为标准储备溶液，浓度均为400 mg/L。从大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆黄素、大豆素和染料木素的6种标准贮备溶液中分别吸取0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL和1.0 mL；加入等体积的水，用50%二甲基亚砜溶液定容至10 mL，得到浓度分别为8.0 mg/mL、16.0 mg/mL、24.0 mg/mL、32.0 mg/mL和40.0 mg/mL的标准系列。

2 结果与分析

2.1 标准曲线与线性范围

标准曲线与线性范围见表2，6种大豆异黄酮R2均在0.9以上，表明线性关系良好。

表2 6种大豆异黄酮标准曲线方程

2.2 检出限

选取样品分别加标，进行逐级稀释，仪器检测，可检出的最小浓度为该样品的检出限，最终得到该实验可达到的检出限为0.2 μg/mL。

2.3 精密度

吸取8.0 μg/mL的大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素标准品溶液，重复进样6次，以测得的峰面积为指标，测定检测方法的精密度。测得大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素的RSD值分别为0.05%、0.07%、0.06%、0.17%、0.23%和0.05%（n=6），表明实验精密度良好。

2.4 样品检测结果

2.4.1 固体类样品中不同种类大豆异黄酮

固体类样品中不同种类大豆异黄酮如表3所示。由以上结果分析可得，不同固体样品中大豆异黄酮总含量比较为腐竹＞豆干＞豆皮＞豆腐＞豆瓣酱＞豆芽＞豆腐乳＞辣条。由此可判断加工工序越少，对大豆异黄酮含量损失越少，且保留的种类越丰富，加工样品原料种类越单一，其含量较高。

表3 固体类样品异黄酮含量（单位：mg/kg）

2.4.2 液体类样品中不同种类大豆异黄酮

液体类样品中不同种类大豆异黄酮如表4所示。由以上实验结果可得，不同液体样品中大豆异黄酮含量比较为豆乳＞豆浆＞酱油＞大豆油。其中大豆油含量较低有可能是因为油脂含量过高，未能将异黄酮全部提出，后期实验过程应针对油脂含量高的样品进行进一步优化。液体样品中异黄酮含量明显低于固体样品，且豆乳、豆浆含量相差不大。

表4 液体类样品异黄酮含量（单位：mg/kg）

2.4.3 不同豆类中不同种类大豆异黄酮

不同豆类中不同种类大豆异黄酮如表5所示。由以上实验结果可得多种豆类产品并不是均含有大豆异黄酮，其中黄豆含量最高，豇豆含量次之。

表5 不同豆类异黄酮含量（单位：mg/kg）

3 结论

大豆异黄酮作为一种天然抗氧化剂，可用于人们日常生活保健，不同种类、不同加工方式影响产品中异黄酮的种类及含量。本研究建立高效液相色谱法测定不同样品中大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素6种大豆异黄酮。通过分析比较得出，固体类样品中的大豆异黄酮含量高于液体类样品，且加工处理方式越单一，对其含量影响越小；豆类产品中多数不含有大豆异黄酮，黄豆含量最高。该方法回收率高，灵敏度高，且操作简单，快速高效，可应用于实际样品中不同种类的大豆异黄酮的分析测定。