兔BMP4基因对毛囊发育相关基因表达的影响

张 琛，李佳丽，靳荣帅，白少成，姚 凡，赵博昊，陈 阳，吴信生

(扬州大学动物科学与技术学院，江苏 扬州 225009)

【研究意义】毛囊是哺乳动物特有的皮肤组织，毛囊发育存在周期性并具备自我再生能力。动物的整体毛发发育与毛囊呈正相关[1]。目前，已有不少影响哺乳动物家兔毛囊发育的基因因子被鉴定[2]，如表皮生长因子(Epidermal Growth Factor, EGF)、成纤维生长因子(Fibroblast Growth Factor, FGF)、角蛋白(Keratin)和角蛋白相关蛋白(Keratin Association Protein, KAPs)、类胰岛素生长因子(Insulion-Like Growth Factor, IGF)等。骨形态发生蛋白(Bone Morphogenetic Protein，BMP)参与毛囊的生长发育，BMP 信号通路在动物毛发生长过程中发挥重要作用[3]。【前人的研究进展】骨形态发生蛋白4(Bone Morphogenetic Protein 4，BMP4)隶属于BMPs家族，其作用是抑制毛囊发育，进而调控毛囊形状、大小和位置[4]。Shh和FGF4促进BMP4的表达，但是BMP4会抑制毛囊发育，进而阻碍FGF4和Shh的表达[5]。毛乳头细胞(Dermal papilla cells, DPCs)是真皮源性细胞，是毛囊生长、分化的必要信号因子，位于毛囊的基底部[6]，在毛囊周期变化过程中起着重要的作用[7]。【本研究切入点】毛乳头细胞作为毛囊发育的信号中心，本文通过构建BMP4基因过表达载体，并转染至家兔毛乳头细胞中，检测其对下游相关基因表达的影响，进而验证BMP4基因对下游基因的调控作用。【拟解决的关键问题】为进一步研究BMP4对兔毛乳头细胞的影响奠定基础。

1 材料与方法

1.1 家兔毛乳细胞的分离与鉴定

首先进行毛乳头细胞的分离，用眼科剪将獭兔两边的触须垂直与皮肤剪下，放入装有D-Hank’s液的培养皿中进行清洗；70%酒精浸泡1 min，用添加双抗的PBS冲洗，除去不规则组织。将采集的样品进行裁剪，裁剪成长条状组织块，并放置于无菌细胞培养皿里，缓慢加入0.25%中性蛋白酶，直至浸没组织块，4 ℃孵育16～24 h，移除蛋白酶液。……