牛乳主要过敏原αS1-酪蛋白的纯化鉴定及其多克隆抗体的制备

何圣发，龙彩云，王 娇，熊 梦，赵江强，燕 燕，董亚萍，李 欣，陈红兵

（1.赣南医学院公共卫生与健康管理学院，江西赣州 341000；2.南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，江西南昌 330047；3.赣州市疾病预防控制中心，江西赣州 341000；4.南昌大学食品学院，江西南昌 330047；5.南昌大学中德联合研究院，江西南昌 330047）

牛乳具有丰富的营养物质，深受人们喜爱，但作为“八大过敏性食物”之一，由于摄入牛乳蛋白而引起的食物过敏现象也引起了国内外的广泛关注[1−4]。牛乳中有30 多种蛋白质可能会导致过敏，其中αS1-酪蛋白不仅含量最高，其致敏性也更强[5−7]。因此，αS1-酪蛋白被认为是牛乳中最重要的过敏原之一，可作为检测食品中是否含牛乳蛋白的一个重要标志物。而αS1-酪蛋白的纯化及其特异性多克隆抗体的制备是建立αS1-酪蛋白检测方法的物质基础。

αS1-酪蛋白、αS2-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白在牛乳中含量分别为12～15、3～4、9～11 和3～4 mg/mL，分子量分别为23.6、25.2、24.0 和19.0 kDa，等电点分别为4.9～5.0、5.2～5.4、5.1～5.4 和5.4～5.6[7]。这些理化性质为各种酪蛋白的分离纯化和鉴定提供了重要依据。例如，DEAE Sepharose Fast Flow、QSepharose 等阴离子交换层析（pH=7.0）是分离纯化酪蛋白的常用方法[8−12]，根据αS1-酪蛋白的等电点最低及蛋白含量最高，可大致判断αS1-酪蛋白的出峰时间最晚，且峰面积较大。另外，由于十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）通常能较准确地指示蛋白质的分子量，因此是鉴定蛋白质最常用的方法[13−15]。然而，研究发现酪蛋白在SDS-PAGE中的迁移速度要比理论值更慢，尤其是由于αS1-酪蛋白的水合粒径较大，导致其在SDS-PAGE 中位于34.5 kDa，远高于其实际分子量[16]。……