2018—2020年河南安阳部分地区种猪群猪伪狂犬病野毒的抗体检测与分析

尉新华，王鹏翔

（1.安阳市动物卫生监督所，河南 安阳 455000；2.安阳市畜产品质量安全监测检验中心，河南 安阳 455000）

猪伪狂犬病野毒（Pseudorabies virus，PRV）是一种高致病性传染病病毒，其对种猪的健康影响很大，会导致母猪出现中途流产、木乃伊胎、死胎等繁殖障碍现象；对于仔猪的影响是最大的，死亡率为100%；这种病对于成年猪的影响不大，感染了PRV的成年猪临床表现为呼吸系统综合征症状，但是成年猪一旦感染了此病，有可能长期成为病毒携带猪，而且有可能会长期排毒，导致整个猪群的免疫力下降，繁殖力变差，对规模化养猪场的打击是致命的[1]。我国是猪肉的生产大国也是消费大国，随着我国人口的不断增加，全国各地养猪场的规模越来越大，导致生猪养殖的密度不断上涨，最恶劣的影响就是导致生猪养殖的环境不断恶化，这对猪伪狂犬病的防治是非常不利的。我国的养猪产业与发达国家有明显区别的一点就是我国农村分布了很多生猪的散养户，不但数量难以统计，而且养殖条件差，防疫观念落后，导致猪伪狂犬病不断发生，这就给规模化猪场的猪病防治带来了极大的挑战[2]。据不完全统计，我国每年因感染猪伪狂犬病野毒死亡的猪有数千万头，因此病的流行而导致养猪业的经济损失高达20亿人民币以上，不但影响了我国的生猪出口，还影响我国的猪肉产品质量，虽然我国已经针对该病的防治大量使用了gE缺失疫苗以及gE鉴别诊断试剂盒，但是受我国经济情况的制约，目前在全国范围内实施清除猪伪狂犬病野毒的计划显然是不现实的，这是因为我国的小规模养猪场在一定时间内还不可能完全禁止，而猪伪狂犬病野毒的传播途径多，且猪伪狂犬病野毒病毒的净化规程还未制定，至今为止，对于猪伪狂犬病野毒的诊断和控制还仅限于在国内科研机构中进行。根据我国现有养猪业的发展情况，该病目前仅能在控制阶段，因此，必须采取一定手段控制猪伪狂犬病野毒的传播和流行，而对规模化养猪场进行种猪群猪伪狂犬病野毒的抗体检测与分析显然是一种相对来说现行有效的手段[3]。2020年7月，笔者所在安阳市动物卫生监督所监测发现河南省安阳市某规模化猪场的繁育种猪出现伪狂犬病野毒明显转阳的现象，为此，笔者对该猪场2018—2020年送检血清样品的免疫（gB）抗体和伪狂犬病野毒抗体的检测数据进行了统计和分析，旨在为掌握该规模化繁育猪场的猪群伪狂犬病野毒感染状况和免疫抗体的水平，为安阳地区猪伪狂犬病的有效控制提供一些参考。

1 材料与方法

1.1 发病背景

河南省安阳市规模化猪繁育场，共有存栏基础母猪600头，品种为长白，哺乳仔猪断奶日龄为26 d。该养猪场一直存在仔猪成活率低的问题，而且母猪也容易在繁育过程中出现死胎、弱胎或者流产的问题，甚至还有木乃伊胎，因此母猪的年均窝产仔猪数很低，一头母猪的PSY（年断奶仔猪数）仅在15头以内，仔猪保育期的成活率也特别低，仅有80%，因此猪场的生产成绩令人担忧。仅2020年，猪场就出现了多次怀孕母猪流产现象，而且猪群有明显的呼吸道症状，哺乳期仔猪有明显的呕吐、腹泻，还有站立不动，浑身发抖的症状，该病应用头孢、青霉素等抗生素均无效，死亡仔猪19窝，共计300头。猪场的检疫人员根据经验判断该猪场因为规模化养殖出现了猪伪狂犬病感染，因此检疫人员积极应对疫情，将病猪、死猪的样本送到安阳市动物卫生监督所进行检测，另外，根据安阳市规模化猪繁育场的存栏数量，再对猪定期进行采血，然后再对血清进行分离，最后将这些血清送到安阳市动物卫生监督所进行猪伪狂犬病的抗体检测[4]。

1.2 病例分析

根据临床症状以及该猪场用药的情况，基本排除了常见细菌病的可能性。由于该猪场免疫的蜂胶苗，蜂胶苗为灭活苗，2005年以前我国许多猪场都应用灭活苗，但是该疫苗有一个很大的缺陷，其主要激活机体的体液免疫，然而对猪群保护需要细胞免疫，所以该疫苗对猪群没有起到一个很好的保护作用。经过了解该猪场肥育猪35日龄免疫一次，母猪产前25 d免疫，由于该猪场未能进行合理次数的免疫，所以导致本次伪狂犬病的发生[5]。

1.3 样品来源

血清全部来源于河南安阳市某存栏600多头母猪的规模化猪场，被检血样共600份，采集种猪的静脉血样3～5 mL，由1个规模化猪场提供。将采好的血样3～6 h析出血清，取上清液置于灭菌的离心管中，并且进行编号，置于-20 ℃备用。

1.4 试剂与试验设备

仪器和试剂详见表1。

表1 仪器型号和厂家

2 方法

伪狂犬病gB、gE抗体采用武汉科前动物生物制品公司生产的伪狂犬病病毒ELISA抗体诊断试剂盒，参照说明书操作及标准判定。

3 结果与分析

3.1 猪伪狂犬病野毒抗体检测情况

3.1.1 种猪PR野毒抗体检测结果 由表2可知，该猪场2018年种猪PR野毒感染较为严重，第三季度的感染率升至44.8%，2019年第一季度到2020年第一季度的阳性率控制较好，在1.9%～11.5%之间，2020第二季度和2020年第三季度种猪PR野毒感染率有所上升，分别为23.8%和58.1%。

表2 不同时期种猪PR野毒抗体检测结果

3.1.2 肥育猪PR野毒抗体检测结果 由表3可知，2018年和2019年该猪场肥育猪群野毒感染率较低，而2020年第三季度开始猪群野毒感染率明显上升，特别是第四季度感染率达到89.9%，感染压力大[6]。

表3 不同时间肥育猪PR野毒抗体检测结果

由表4可知，2018—2020年60～100日龄的肥育猪群PR野毒感染率分别为5.4%、2.5%、1.8%，而100～210日龄的肥育猪群PR野毒感染率分别为5.6%、4.4%和57.6%。由此可见，100～210日龄猪群野毒感染率高于60～100日龄的猪群。

表4 不同日龄肥育猪PR野毒感染率 %

3.2 猪伪狂犬病免疫抗体检测情况

3.2.1 种猪PRV免疫抗体检测结果 由表5可知，2018年2月和4月检测的种猪群RPV免疫抗体阳性率达到100%，而7月免疫抗体降低至71.4%。2020年2月和5月抽检，PRV免疫抗体阳性率为100%和75.7%[7]。

表5 种猪PRV免疫抗体检测结果

3.2.2 不同日龄肥育猪群PRV免疫抗体检测结果由表6可知，随着日龄的增大，2018—2019年肥育猪群PRV免疫抗体阳性率从60日龄的66.7%下降到90～100日龄的25.0%，而120～130日龄免疫抗体阳性率由41.7%上升至130～160日龄的70.6%[8]。

表6 不同日龄肥育猪PRV免疫抗体检测结果

4 结果与讨论

目前，我国一般采用gE基因缺失疫苗用来预防猪伪狂犬病野毒，这种疫苗的使用可以清楚地区分自然感染猪和免疫猪，采用的是血清学方法。猪伪狂犬病野毒抗体可以通过PRV gI抗体检测试剂盒快速检测出来，这种方法被用于评估规模化养猪场的猪伪狂犬病野毒感染的状况。还有一种试剂盒，那就是Herdchek猪伪狂犬病gB抗体检测试剂盒，这种试剂盒非常灵敏，即使是非常微量的抗体水平，也能够检测出抗体结果。本次检测的Herdchek猪伪狂犬病gB抗体猪群是PR野毒抗体阴性猪群，因此，抗体水平可以反映出猪群的疫苗免疫结果[9]。

由PR野毒感染结果不难看出，该规模化猪场的猪群野毒的感染状况是呈现动态性变化的，2018年的猪伪狂犬病野毒感染比较严重，2018年的第一季度、第二季度、第三季度野毒感染率都较高，分别为15.6%、20.6%、44.8%，在此之后，猪场采取了对猪群加强免疫，并且对带毒猪进行淘汰，可见猪场的野毒感染状况已经出现明显好转，2019年第一季度到2020年第一季度的阳性率控制较好，在1.9%～11.5%之间，但是2020年第二季度以后，野毒感染率明显上升，种猪的野毒感染率高达58.1%。可见定期对猪群进行疫苗免疫是非常有必要的[10]。

通过猪场的肥育猪的猪群野毒检测不难看出，2020年第三、四季度感染率分别为12.6%和89.9%。2018—2020年不同日龄肥育猪PR野毒感染检测结果表明100～210日龄猪群的野毒感染率要明显高于60～100日龄[11]。

伪狂犬病免疫（gB）抗体检测表明种猪群的抗体阳性率明显要高于肥育猪，种猪抗体阳性率为71.4%～100.0%；肥育猪免疫抗体阳性率出现较为明显的波动[12]，70～80日龄的阳性率为52.9%，80～130日龄的阳性率为25.0%～41.7%，130～160日龄的免疫抗体阳性率为70.6%，可能与该猪场在65～70日龄采取免疫某进口猪伪狂犬病疫苗有关。种猪由于采取每年3～4次普免猪伪狂犬病疫苗，免疫抗体水平较高，同时野毒感染率也较低，但是肥育猪在80～130日龄免疫抗体水平很低，基本处于免疫空白期[13]。

猪伪狂犬病是规模化养猪场的重要疫病，不但会导致种猪的繁殖障碍，还会导致仔猪的成活率低，死亡率高等，而且会导致肥育猪发生呼吸道病综合征[14]。目前该病在我国并未完全根除，因此，对猪群加强疫苗接种，尤其要根据规模化猪场的特点定期对猪群进行疫苗接种，还要定期对猪群的猪伪狂犬病野毒抗体进行检测，这仍然是一种行之有效的方法[15]。