Apelin-36对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞凋亡及线粒体功能的影响*

窦姗姗 高丽颖 林馨怡 孟 尧 董 康 程葆华

(济宁医学院基础医学院，济宁 272067)

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种常见的仅次于阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)的神经退行性疾病[1]，其主要病理特征是黑质致密部多巴胺能神经元发生退行性变，并伴有路易氏小体(Lewy body，LB)出现。LB主要是由于α-突触核蛋白(α-synuclein)的异常积累形成的[2]。PD的发病机制还不清楚，而线粒体功能障碍与PD发病机制密切相关[3-4]。

鱼藤酮(rotenone)是一种细胞毒性物质，可选择性地抑制细胞呼吸链 NADH 脱氢酶(即复合物I，complex I)的活性，使NADH氧化为NAD的过程受阻，减少ATP生成，阻碍质子传递，细胞中活性氧的含量进而增加，导致自由基过量累积，从而促进细胞凋亡[5-6]。

Apelin最初是从牛胃组织中分离出来的。Apelin-13、apelin-17和apelin-36是apelin前体肽经水解生成的生物活性形式。越来越多的证据表明，apelin可能在PD模型中具有神经保护作用[7-8]。

本实验用鱼藤酮刺激SH-SY5Y细胞，制作PD体外模型，然后用apelin-36干预，研究apelin-36的神经保护作用及对线粒体功能的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1试剂 人神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y细胞)购自美国菌种保藏中心(ATCC)；DMEM培养液(美国Hyclone公司)；鱼藤酮(美国Sigma公司)；Apelin-36(美国Phoenix Pharmaceuticals公司)；CCK-8(日本Dojindo公司)；Hoechst 33342检测试剂盒(日本Dojindo公司)；线粒体复合物 I(complex I)ELISA 试剂盒(酶免),ADP/ATP比率检测试剂盒(日本Dojindo公司)；RIPA裂解液(碧云天公司)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(天根生物公司)；超敏ECL化学发光试剂盒(万类生物公司)；α-synuclein抗体、bcl-2抗体、Bax抗体(美国Cell Signaling Technology公司)；β-actin抗体(北京中杉金桥有限公司)。

1.1.2仪器 微量移液器(德国 Eppendorf公司)；CO2培养箱(美国Thermo公司)；台式低温高速离心机(美国Beckman公司)；超声波细胞粉碎仪(江苏波场智能科技股份有限公司)；……