氟康唑片在中国健康受试者的生物等效性研究

张丽英，郭彩会，宋浩静，刘亚丽（.河北省人民医院药学部，石家庄 05005；.石家庄四药有限公司，石家庄 0500）

氟康唑作为氟代三唑类抗真菌药物，主要是通过抑制真菌细胞膜合成受阻，进而影响真菌细胞的生长繁殖。因氟康唑具有抗真菌谱广，抗菌活性强，口服吸收良好，在体内分布广，毒性低等特点，在临床上得到广泛应用。本试验参考《以药动学参数为终点评价指标的化学药物仿制药人体生物等效性研究技术指导原则》，研究氟康唑片的人体生物等效性。

1 材料与研究对象

1.1 试药和仪器

氟康唑片受试制剂（T）（规格：150 mg /片，石家庄四药有限公司，批号：FZ16120901）；氟康唑片参比制剂（R）（规格：150 mg /片，Pharmaceuticals LLC，批号：H79933）。氟康唑片化学对照品（纯度：99.7%，批号：100314-201605，中国食品药品检定研究院）；氟康唑片-d4（内标）（纯度：98.7%，批号：1132-051A1，加拿大TLC Pharmaceutical Standards 公司）。空白基质（人血浆和人全血，肝素钠抗凝）均来自中国健康志愿者，由河北省人民医院Ⅰ期临床研究室提供。甲醇（HPLC 级）、乙腈（HPLC 级）、甲酸（LC/MS级）（赛默飞世尔科技有限公司），甲酸（色谱级，Aladdin）。

1.2 受试者选择与入组完成情况

本试验方案经河北省人民医院伦理委员会批准[（2017）药伦审第（02）号]。所有受试者均在充分了解本试验的目的、方法及风险后，自愿签署知情同意书，年龄要求18 ～45 岁，单一性别受试者人数不少于总人数的 1/3，体质量指数在19.0 ～26.0 kg·m；无滥用药物史、药物依赖史；近3 个月内未参加过其他临床试验且未献血；近2 周内未服用任何药物；统一进行查体和实验室检查，经筛选合格并随机纳入空腹试验的受试者24 例，餐后试验的受试者因筛选困难，合格21 例，虽未满足方案，但病例数符合相关法规要求。45 例受试者均按要求完成试验，空腹组与餐后组健康受试者的一般资料见表1。

表1 空腹组与高脂餐后组健康受试者的一般资料
Tab 1 General information of healthy subjects in the fasting group and the postprandial group

一般资料空腹组（n ＝24）餐后组（n ＝21）性别[n（%）]男15（62.5）12（57.1）女9（37.5）9（42.9）年龄/岁 30.2±6.09 29.0±7.76身高/cm168.50±9.103166.48±6.783体质量/kg 64.29±8.523 62.33±8.558 BMI/（kg·m－2） 22.59±1.853 22.42±1.956

2 方法

2.1 给药方案与血样采集

本研究采用单中心、单剂量、随机、开放、两周期、自身交叉对照试验设计，评价氟康唑片在空腹及高脂餐后两种状态下的生物等效性研究。空腹组24 例，高脂餐组21 例，分别将空腹组和高脂餐组的健康受试者随机分为两组，交叉给药，每周期给药一次，洗脱期为 14 d。空腹组受试者空腹过夜 10 h 以上，服用相应受试制剂或参比制剂150 mg，用 240 mL 水送服，于给药前1 h 内（0 h）和给药后0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、6、12、24、36、48、72、96、120 h 采集静脉血，每次取血约4 mL 至EDTA-K抗凝真空采血管中。高脂餐组受试者空腹过夜10 h 以上，于第2日早上在服药前 30 min 开始高脂（提供食物中约50%的热量）高热量餐（约800 ～1000 kcal）（高脂餐成分见表2，30 min 内结束进餐），在进餐后30 min 时开始服用相应受试制剂或参比制剂，用水240 mL 送服，于高脂餐后服药前（0 h）和给药后0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、6、12、24、36、48、72、96、120 h 采集静脉血，每次取血约4 mL 至EDTA-K抗凝的真空采血管中。空腹组和高脂餐组所采集的血样在1 h 内4℃、1700 g离心10 min，所有离心后血浆样品分成两份，在－60℃冰箱中保存，以供药动学分析。

表2 高脂餐成分表
Tab 2 Ingredient list of high fat meal

总热量/kcal伊利纯牛奶250 mL32 85.550167.5雨润台式烤肠60 g 43.4 76.7 21.4141.5煮蛋约110 g 45.5 88.8 7.9142.2味出道牛角面包115 g 34.0283.6209.8527.4总计154.9534.6289.1978.6种类总量蛋白质/kcal脂肪/kcal碳水化合物/kcal

2.2 测定方法与血样处理

2.2.1 色谱条件 色谱柱：GL Sciences InertSustain C（3 μm，2.1 mm×50 mm）；柱温：40 ℃；阀R：初始值1；自动进样器温度：4℃；流动相：0.1%甲酸水（A）-100% 乙腈（B）；梯度洗脱（0 ～1.3 min，15.0%→50.0%B；1.3 ～1.6 min，50.0%→95.0%B；1.6 ～2.5 min，95.0%B；2.5 ～2.6 min，95.0%→15.0%B；2.6 ～3.5 min，15.0%B）；流速：0.4 mL·min；进样体积：3.0 μL；分析时间：3.5 min。

2.2.2 质谱条件 电离化模式：ESI；接口温度：300 ℃；DL 温度：250 ℃； 雾化气流量：3.00 L·min；加热气流量：10.00 L·min；加热块温度：400℃；干燥气流量：10.00 L·min；分析模式：正离子模式（MRM）。氟康唑的离子对：307.10/220.10，驻留时间：100.0 ms，碰撞能量（CE）：－17.0 V；内标氟康唑-d4 的离子对：311.10/223.10，驻留时间：100.0 ms，碰撞能量（CE）：－18.0 V。

2.2.3 血浆样品处理 样品室温下融化后，涡旋混匀，吸取30.0 µL 样品（校正标样、质控样品或测试样品）至96 孔板中，对于双空白样品或QC样品，加入30.0 µL 空白基质；加入30.0µL 内标溶液，对于双空白样品加入30.0 µL 50%ACN 溶液；加入180.0 µL 的100%乙腈，涡旋约10 min，在约4 ℃条件下2600 g 离心10 min；转移30.0 µL 上清液至已加入270.0 µL 30%乙腈溶液的96 孔板中，涡旋5 min，待进样。

2.3 统计学处理

采用WinNonlin 7.0 软件对氟康唑的参比制剂和受试制剂的血药浓度进行非房室模型药动学参数的估算分析，其他分析及作图采用SAS 9.4软件完成。采用BES，将主要药动学参数

C

、

AUC

、

AUC

经对数转换后，进行方差分析和90%置信区间分析，将

t

进行配对秩和检验，评价两制剂的生物等效性。

3 结果

3.1 方法学考察

液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）法的方法学验证由苏州国辰科技股份有限公司生物分析部完成。血浆中内源性物质不干扰氟康唑的测定。氟康唑在10.0 ～5000 ng·mL与峰面积线性关系良好，准确度及精密度结果见表3。血浆样品中氟康唑的提取回收率为95.0%～99.9%，内标氟康唑-d4 的回收率为 91.7%。氟康唑在 25 000 ng·mL浓度范围内，稀释因子为 1∶10 时具有良好的稀释可靠性。血浆样本分别在－20℃和－80℃条件下储存28 d、90 d 的稳定性良好，血浆样本在－60℃条件下经过5 次冻融循环的稳定性良好；血浆样本在处理前室温条件下放置25 h 以及提取后在自动进样器（温度设置：4℃）放置94 h 稳定性良好；全血样本于冰浴条件下放置2 h 内的稳定性良好；溶血基质效应、高脂基质效应、残留均不影响血浆中氟康唑的准确定量。方法学验证结果表明本方法可用于临床试验血浆样品的分析。

表3 血浆中氟康唑的精密度和准确度
Tab 3 Precision and accuracy of fluconazole in human plasma

质量浓度/（ng·mL－1）批内批间测定值/（ng·mL－1）RSD/%测定值/（ng·mL－1）RSD/%10.0 9.54±0.232.4 9.77±0.414.2 30.0 29.1±0.72.4 29.2±0.62.1 375375±30.80 368±113.0 20002110±733.52050±763.7 37503720±350.90 3620±1103.0

3.2 血药浓度-时间曲线及药动学参数

空腹组和餐后组受试者口服受试制剂和参比制剂后，氟康唑的平均血药浓度-时间曲线见图1，药动学参数见表4。

表4 空腹和高脂餐受试者口服受试制剂和参比制剂后的主要药动学参数(mean±SD)
Tab 4 Main pharmacokinetics parameters of fasting and high-fat diet subjects after the oral administration of the test and reference
preparations (mean±SD)

参数空腹组高脂餐组试验制剂（n ＝24）参比制剂（n ＝24）试验制剂（n ＝21）参比制剂（n ＝21）Cmax/（ng·mL－1）4287.08±1016.764052.92±723.383275.71±377.083373.33±439.46 AUC0 ～t /（×105 ng·h·mL－1）1.30±0.19 1.33±0.19 1.26±0.17 1.28±0.20 AUC0 ～∞/（×105 ng·h·mL－1）1.38±0.19 1.41±0.21 1.33±0.19 1.35±0.22 tmax/h0.50（0.25，2.5）1.00（0.25，3.00）3.00（1.5，6.00）3.00（1.0，6.0）t1/2/h28.8±3.529.5±4.227.9±4.827.7±3.9

图1 健康受试者空腹（A）和餐后（B）单次口服150 mg 氟康唑片的平均血药浓度-时间图Fig 1 Mean plasma concentration-time diagram of a single oral dose of 150 mg fluconazole tablets in healthy subjects on a fasting stomach（A）and after a meal（B）

3.3 生物等效性分析

在空腹状态下口服氟康唑受试制剂和参比制剂的

C

、

AUC

及

AUC

的几何均值的比值分别为104.64%、98.01%和97.64%，90%

CI

分别为97.04%～112.85%、96.57%～99.48%和 96.18%～99.12%，个体内变异分别为15.32%、3.00%和3.04%。在餐后状态下口服氟康唑受试药物和参比药物的

C

、

AUC

及

AUC

的几何均值的比值分别为97.42%、98.65%和98.88%，90%

CI

分别为94.28% ～100.67%、95.90% ～101.48%和95.69%～102.17%，个体内变异分别为 6.14%、5.30%和6.14%。与参比制剂比较，受试制剂

C

、

AUC

及

AUC

的90%置信区间均落在参比制剂的80.00%～125.00%，说明两种制剂具有生物等效性。

3.4 安全性评价

本试验空腹组共有24 例受试者纳入安全性评价，服用受试制剂后，有6 例受试者发生7 例次不良事件，分别为丙氨酸氨基转移酶升高、心悸、恶心、上呼吸道感染、血脂升高、血小板升高、发热，其中除前3 例不良事件研究者判断与研究药物可能无关外，其余均与研究药物肯定无关。上呼吸道感染这一不良事件严重程度为Ⅱ级，其余均为Ⅰ级。因受试者的上呼吸道感染发生在洗脱期，口服感冒清热软胶囊后缓解，经研究者分析，此药物不影响氟康唑的药动学参数，同意继续进入第二周期试验。服用参比制剂后，有3例受试者发生3 例次不良事件，分别为转氨酶升高、尿上皮细胞升高、上呼吸道感染，其中转氨酶升高与研究药物可能有关，其余2 例与研究药物肯定无关，严重程度均为Ⅰ级。

高脂餐后组共有21 例受试者纳入安全性评价，服用受试制剂后，有4 例受试者发生4 例次不良事件，分别为尿潜血阳性、智齿冠周炎、针刺伤、发热，其中除尿潜血阳性与研究药物可能无关外，其余3 例均与研究药物肯定无关。服用参比制剂后，有2 例受试者发生2 例次不良事件，1 例不良事件为丙氨酸氨基转移酶升高，判断与研究药物可能有关，另1 例为尿白细胞高，与研究药物可能无关。受试制剂和参比制剂阶段所有不良事件的严重程度均为Ⅰ级。

空腹组与餐后组均未发生严重不良事件和导致退出试验的不良事件。以上表明在空腹和餐后状态下健康受试者单次口服150 mg 氟康唑受试制剂与参比制剂在体内具有相似的安全性和耐受性。

4 讨论

氟康唑是目前临床上常用的抗真菌药，本研究得出其血浆消除半衰期为30 h 左右，大约120 ～150 h 达到稳态血药浓度，所以目前临床上每日给药一次是科学合理的，但对于肝肾功能不全的患者，药物的半衰期会明显延长，血药浓度升高，易发生蓄积中毒，建议临床上应根据患者具体情况，通过监测氟康唑的稳态血药浓度来调整用药剂量。

氟康唑不良反应主要有头痛、头晕、皮疹、腹痛、腹泻、恶心、呕吐、肝肾功能异常、血液学指标改变等，本研究中受试者出现的不良反应有丙氨酸氨基转移酶升高、心悸、恶心、尿潜血阳性、转氨酶升高，与说明书中基本一致。临床用药后易产生胃肠道反应和中枢系统不良反应，有时导致严重的肝损伤或血液系统疾病，故对于该药可能会出现消化道系统的不良反应的人群应餐后服用，这样可借助食物的作用避免药物对消化道的刺激，对于接受氟康唑治疗的患者建议定期检查肝功能。

本研究氟康唑片血药浓度的测定方法可靠，血浆样本中的杂质对氟康唑的测定无干扰，受试制剂和参比制剂

C

、

AUC

及

AUC

的几何均值的比值90% 置信区间均落在参比制剂80.00%～125.00% 内，表明本试验两种制剂具有生物等效性。其研究结果的主要药动学参数与文献报道的数据基本一致，健康受试者在试验期间发生的不良事件也基本一致，为患者安全用药提供了质量保证。