Nod2基因在肺炎克雷伯菌肝脓肿中的作用研究

孟 宝，伍 婷，苏 丛，孙雅婷，唐明洋，郭明娟，兰燕虎，李家斌,,5

化脓性肝脓肿是肝脏的占位性病变，具有高的致病率和致死率，肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae，K.pneumoniae)是其主要的致病菌之一[1-2]。核苷酸结合寡聚化结构域2(nucleotide binding oligomerization domain 2，NOD2)是核苷酸结合寡聚化结构域样受体 (nucleotide binding oligomerization domain-like receptor，NLR) 家族的成员，参与激活NF-κB、MAPKs等促炎通路，增强炎症反应，调节机体免疫应答[3]。近期研究[3-7]表明，NOD2在肺组织防御病原菌感染过程中发挥重要保护作用。目前关于NOD2在肝组织防御病原菌感染过程的作用机制尚不明确。该研究通过繁育和鉴定Nod2基因肝组织条件性敲除小鼠[8]，建立Nod2基因肝脏敲除小鼠感染K.pneumoniae诱发肝脓肿模型，初步探究Nod2基因在K.pneumoniae诱导肝脓肿发生发展中的作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1实验动物与菌株Nod2flox/+小鼠共 3 只，雌鼠 1 只、雄鼠 2 只；Alb-Cre+工具鼠共 2 只，雌、雄各 1 只均购自赛业(广州)生物科技有限公司，20～30 g/6周龄，小鼠品系为C57BL/6J，无特殊病原体(SPF级)。K.pneumoniaeATCC13883由安徽省细菌耐药监测中心保存。所有实验操作均遵循安徽医科大学第一附属医院伦理委员会的批准，伦理审批号：LLSC20190253。

1.1.2主要试剂与仪器 主要试剂：鼠尾基因组DNA 提取试剂盒(货号：NMSC0001-50)购自上海南方模式生物科技股份有限公司；琼脂糖粉(批号：111860)购自生工生物工程(上海)股份有限公司；Trizol Reagent(货号：15596026)购自美国Invitrogen公司；RNA反转录试剂盒(货号：6210A)、DL2000 bp DNA Marker(货号：A1A0438)、TB Green Premix Ex TaqTM(货号：RR420)以及PCR Taq Mix(货号：RR901)均购自日本Takara公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒(货号：P0010S)购自碧云天生物技术有限公司；小鼠抗β-Actin 抗体(货号：AF7018)购自江苏亲科生物研究中心有限公司；兔抗NOD2抗体(货号：abs152480)购自爱必信(上海)生物科技有限公司；……