药用卤化丁基橡胶塞中2-巯基苯并噻唑的检测

贾菲菲，程佳美，赵霞，杨会英，肖新月

(中国食品药品检定研究院，北京 100050)

药用卤化丁基橡胶塞是由生胶经配合、混炼、预成型、硫化、冲切、清洗硅化、包装等步骤制备而成[1]，其中硫化是非常重要的一步。在制备橡胶塞时，需要在生胶中加入各种硫化剂、硫化活性剂和硫化促进剂。2-巯基苯并噻唑作为通用型硫化促进剂，合成研究报道很多，广泛应用于各种橡胶的制备中，硫化状态比较平稳，硫化性能良好。对于天然橡胶和通常以硫黄硫化的合成胶具有硫化促进作用，可以使橡胶制品具有很高的拉伸强度和硬度。

2-巯基苯并噻唑在橡胶中易分散，但具有一定的毒性。2-巯基苯并噻唑可能会刺激皮肤和黏膜，能引起皮炎及难以治疗的皮肤溃疡，可致敏而且在2A类致癌物清单中。在与药品的长期接触中，药用卤化丁基橡胶塞中的添加剂有可能会迁移至药品中，对药品的质量、安全性和有效性产生影响。根据2018年4月发布的《化学药品与弹性体密封件相容性研究技术指导原则(试行)》[11]，2-巯基苯并噻唑被列为慎用添加剂，需要高度重视其迁移至药品中的可能性。因此，有必要对2-巯基苯并噻唑进行考察及控制，以保障其残留量安全。本研究采用超声萃取及高效液相色谱法，建立了药用卤化丁基橡胶塞中2-巯基苯并噻唑含量的测定方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters 2695液相色谱仪及PDA检测器(美国沃特世公司)；电子天平(美国梅特勒-托利多集团)；MARS5微波消解仪(CEM)。

1.2 试药 2-巯基苯并噻唑(中国食品药品检定研究院,纯度：99.1%，195066-202001)；乙腈(Fisher，203096)；丙酮(Fisher，172014)；去离子水(Millipore)。

试验样品共2批，1批注射液用氯化丁基橡胶塞，1批注射液用溴化丁基橡胶塞，均由厂家A提供。回收率试验采用注射液用氯化丁基橡胶塞的样品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：ZORBAX SB-C8(4.6 mm×250 mm，5 μm)；检测器：紫外检测器，检测波长：320 nm；流动相：A液为1%乙腈水溶液，B液为乙腈，洗脱梯度见下表；流速：1.0 mL·min-1；柱温：25 ℃；进样量：10 μL。

表1 液相色谱洗脱梯度

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取2-巯基苯并噻唑约10 mg，置于10 mL容量瓶，加丙酮溶解并定容，即得2-巯基苯并噻唑对照品溶液。精密量取上述2-巯基苯并噻唑对照品溶液，依次稀释制成浓度为1、5、10、30、50、80、100 μg·mL-1的系列2-巯基苯并噻唑对照品溶液。

2.2.2 样品溶液制备 取剪碎后的胶塞样品约1.0 g，精密称定，置萃取罐中，共2份，每份加入10 mL丙酮，盖好瓶塞，在60 ℃条件下微波提取30 min后取出，经0.45 μm的滤膜过滤后收集于25 mL容量瓶中，取出样品放回萃取罐中按上述过程加入15 mL丙酮再提取一次和过滤。合并滤液并定容至25 mL，即得样品溶液。

2.3 方法学验证

2.3.1 线性关系考察 取“2.2”项下的系列对照品溶液，依次注入液相色谱仪，按照“2.1”项下的色谱条件检测，记录色谱图。以浓度及峰面积绘制标准曲线，计算相关系数。试验结果见表2，相关系数良好，表明2-巯基苯并噻唑在1.02～102.26 μg·mL-1范围内线性良好。2-巯基苯并噻唑的典型色谱图如图1所示。

表2 2-巯基苯并噻唑线性试验结果

图1 2-巯基苯并噻唑对照品溶液色谱图

2.3.2 检出限和定量限 吸取“2.2”项下浓度约1 μg·mL-1的对照品溶液，逐步稀释注入液相色谱仪，按照“2.1”项下的色谱条件检测，信号与噪音之比为3时为检出限，信号与噪音之比为10时为定量限。经试验，2-巯基苯并噻唑的检出限和定量限分别为0.03 μg·mL-1和0.10 μg·mL-1。

2.3.3 精密度 分别吸取“2.2”项下制备的浓度约为10、30、50 μg·mL-1对照品溶液10 μL，连续注入液相色谱仪6次，按照“2.1”项下的色谱条件检测，计算峰面积的RSD，结果见表3。经计算，峰面积RSD小于3.0%，表明方法精密度良好。

表3 2-巯基苯并噻唑精密度试验结果

2.3.4 稳定性 分别吸取“2.2”项下制备的浓度约为10、30、50 μg·mL-1对照品溶液10 μL，于放置0及24 h后再注入液相色谱仪，按照“2.1”项下的色谱条件检测，计算峰面积的RSD，结果见表4。经计算，峰面积RSD小于3.0%，表明对照品溶液放置24 h稳定性良好。

表4 2-巯基苯并噻唑稳定性试验结果

2.3.5 回收率试验 精密称取2-巯基苯并噻唑约10 mg，置于10 mL容量瓶，加丙酮溶解并定容，即得2-巯基苯并噻唑提取回收对照品溶液。

取剪碎后的注射液用氯化丁基橡胶塞约1.0 g，精密称定，置萃取罐中，共9份，每3份中分别加入0.20、0.25、0.30 mL上述2-巯基苯并噻唑提取回收对照品溶液，然后加丙酮至10 mL，盖好瓶塞，在60 ℃条件下微波提取30 min后取出，经0.45 μm的滤膜过滤后收集于25 mL容量瓶中，取出样品放回萃取罐中按上述过程加入15 mL丙酮再提取1次和过滤。合并滤液并定容至25 mL，即得回收率试验样品溶液。

通过外标法计算得注射液用氯化丁基橡胶塞中2-巯基苯并噻唑的回收率在97.8%～108.9%之间，表明方法准确度良好，测定结果见表5。

表5 氯化丁基橡胶塞中2-巯基苯并噻唑提取回收率试验结果

2.4 样品测定 取注射液用氯化丁基橡胶塞和注射液用溴化丁基橡胶塞各2份，按“2.2”项下制备样品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行试验。经检测，注射液用氯化丁基橡胶塞和注射液用溴化丁基橡胶塞中均未检出2-巯基苯并噻唑。

3 讨论

2-巯基苯并噻唑为基因毒性杂质，具有比一般杂质更大的危害性，可能会间接或直接损伤细胞DNA，诱导细胞产生基因突变，导致染色体重排或断裂，从而产生致突变或致癌的风险[12]。根据《化学药品与弹性体密封件相容性研究技术指导原则(试行)》，2-巯基苯并噻唑被列为慎用添加剂，应开发高灵敏度的检测方法对密封件中可能残留的2-巯基苯并噻唑进行检测。本研究所考察的2种药用卤化丁基橡胶塞中均未检测到2-巯基苯并噻唑。

在后续的相容性研究中，对卤化丁基胶塞中的2-巯基苯并噻唑进行定性定量分析后，还应进一步建立药品中该添加剂的检测方法及其含量的测定。尤其是在稳定性试验中，随着药品放置时间的延长，应关注药品中2-巯基苯并噻唑的含量变化，判定是否会对药品的安全性和有效性带来影响。本研究也将在后续工作中继续对药用卤化丁基橡胶塞所保护的药品中的2-巯基苯并噻唑进行检测方法的建立研究。

本研究建立了一种高效液相色谱法测定药用卤化丁基橡胶塞中的2-巯基苯并噻唑的分析测试方法。该方法简便快速，选用丙酮作为萃取剂，通过两次微波萃取后可以达到很好的提取效果。该方法检测限低，精密度高，加标回收率好。在1.02～102.26 μg·mL-1的浓度范围内线性良好，相关系数r=0.999 9，检出限为0.03 μg·mL-1，精密度、稳定性RSD均小于3%，样品加标回收率为97.8%～108.9%，证明通过此方法可获得准确、可靠的2-巯基苯并噻唑测试结果。