葛根芩连汤抑制TNF-α诱导的Caco-2细胞氧化损伤配伍规律研究

林 川，董文敏，张倩芸，刘王振祖，梁 琨，王新宏，安 叡*

葛根芩连汤抑制TNF-α诱导的Caco-2细胞氧化损伤配伍规律研究

林 川1，董文敏2，张倩芸1，刘王振祖1，梁 琨1，王新宏1，安 叡1*

1. 上海中医药大学中药学院，上海 201203 2. 复旦大学附属浦东医院，上海 201200

探讨葛根芩连汤缓解肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）诱导的人结肠癌Caco-2细胞氧化应激损伤作用及其配伍规律。将Caco-2细胞随机分为对照组、TNF-α（80 μg/L）组、小檗碱（6.73 μg/mL）组及葛根芩连汤配伍组（全方组、去甘草组、去葛根组、葛根甘草组和黄芩黄连组，18.75 μg/mL）。除对照组外，其余各组细胞给予TNF-α预处理2 h，再给予相应药物处理24 h。MTT检测Caco-2细胞活力；流式细胞术检测细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平；比色法检测细胞中总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）活性和丙二醛（malondialdehyde，MDA）、还原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）水平；qRT-PCR和Western blotting分别检测核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，）、还原型辅酶I/II醌氧化还原酶1[NAD(P)H quinine oxidoreductase 1，]和血红素氧合酶-1（heme oxygenase 1，）mRNA和蛋白表达；荧光显微镜观察Nrf2蛋白入核情况。5.0～25.0 μg/mL的含药培养基和10～80 μg/L的TNF-α对Caco-2细胞活性无明显影响。与TNF-α组比较，各给药组Caco-2细胞ROS水平显著降低（＜0.01）；除去葛根组和黄芩黄连组外，其余各组MDA水平显著降低（＜0.01），GSH水平明显升高（＜0.01）；除去葛根组外，其余各给药组基因表达明显升高（＜0.01），全方组和去甘草组基因表达明显升高（＜0.05、0.01），全方组和葛根甘草组基因表达明显升高（＜0.05、0.01）；除黄芩黄连组外，其余各组Nrf2和HO-1蛋白表达显著升高（＜0.01）；除去葛根组和黄芩黄连组外，其余各组NQO1蛋白水平显著升高（＜0.05、0.01），Nrf2蛋白入核明显增加（＜0.05、0.01）。缺少葛根对葛根芩连汤抑制Caco-2细胞氧化应激损伤有较大影响。

葛根芩连汤；葛根；配伍规律；氧化应激；……