分光光度法测定海鱼罐头中组胺含量*

2022-10-21 07:52戴志英杨梅桂施逸岚杨清华
化学工程师 2022年9期
关键词:离心管纯水提取液

戴志英,杨梅桂,施逸岚,杨清华

(江苏省南通市疾病预防控制中心,江苏 南通 226000)

深海鱼金枪鱼、秋刀鱼、鲭鱼、沙丁鱼、鲐鱼、鲥鱼、马鲛鱼等肉质柔嫩鲜美,营养元素丰富,这些青皮红肉深海鱼中含有较多的组氨酸,如保存不当会发生质量变化,海鱼在微生物的组氨酸脱羧酶作用下产生大量组胺,当人体摄入过量的组胺时,会引起头痛、恶心、心悸、血压变化、呼吸紊乱等反应,严重时还会危及生命[5,6]。现在市场上各类海鱼罐头很多,为确保市民食用安全,本文在GB5009.208-2016国家标准方法的基础上,建立了方便快捷的海鱼罐头中组胺的测定方法。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

正戊醇(AR)、HCl(GR)、HClO4(GR)、Na2CO3(AR)、NaNO2(AR),国药集团化学试剂有限公司;NaOH(GR上海山海工学团实验二厂);对硝基苯胺(AR阿拉丁试剂公司);

组胺二盐酸盐标准品(GR德国);

50g·L-1Na2CO3溶液5g Na2CO3用纯水溶解,并用纯水稀释至100mL,混匀;

250g·L-1NaOH溶液25g NaOH用纯水溶解并稀释至100mL,混匀;

1+11(v/v)HCl溶液55mL纯水中加5mL HCl,混匀;

甲液(对硝基苯胺溶液) 称取0.5g对硝基苯胺,加5mL HCl溶解后,再用纯水稀释至200mL,混匀,临用现配;

乙液(NaNO2溶液)称取0.5g NaNO2,用纯水溶解并稀释至100mL,混匀,临用现配;

偶氮试剂 吸取5mL甲液、40mL乙液混合,临用现配;

1000μg·mL-1磷酸组胺标准溶液 精密称取0.0250g组胺二盐酸盐标准品,溶于纯水,移入25mL容量瓶中,并用纯水稀释至刻度,混匀;

20μg·mL-1磷酸组胺标准使用液 吸取1mL 1000μg·mL-1磷酸组胺标准溶液于50mL容量瓶中,加纯水至刻度,混匀;

CFAPA-QC056B-1鱼肉粉中组胺残留量检测质控样品(指定值(452.8±64.9)mg·kg-1,大连中食国实检测技术有限公司)。

WFJ7200型分光度计(龙尼柯(上海)仪器有限公司);PRIMOR离心机(赛默飞世尔科技公司);TALB YS振荡器(Thoemner公司);50mL塑料离心管。

1.2 实验方法

1.2.1 标准曲线的制备 分别吸取20μg·mL-1的磷酸组胺标准溶液0.0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.0mL于10mL具塞比色管中,相当含0、4、8、12、16、20μg组胺,加水至1mL,加入1mL(1+11)HCl溶液,混匀,加入50g·L-1Na2CO3溶液3mL,偶氮试剂3mL,加水至刻度,混匀,放置10min,在480nm波长处,用1cm比色皿零管调零测定吸光度,绘制标准曲线。

1.2.2 样品处理 称取10g已绞碎均匀的样品于50mL塑料离心管中,加入5%的HClO4溶液40mL浸泡2~3h,将离心管置于电动振荡器中振荡10min,然后将离心管放到离心机以8000r·min-1的速度冷冻离心5min,取2~4mL上清液于50mL的塑料离心管中,用NaOH溶液调pH值为10~12,加入正戊醇9mL,将离心管置于电动振荡器中振荡5min,接着再以8000r·min-1的速度冷冻离心5min,取上层正戊醇提取液2mL于50mL塑料离心管中,加(1+11)HCl溶液9mL在电动振荡器上振荡5min,再以8000r·min-1速度冷冻离心5min,用一次性塑料吸管将上层正戊醇弃去,下层HCl提取液供测定。

1.2.3 样品测定 吸取HCl 2mL提取液于10mL具塞比色管中,以下操作同1.2.1标准系列同法操作,测定吸光度,计算样品中组胺含量。

1.2.4 计算公式

式中X:试样中组胺的含量,mg/100g;m2:2mL HCl提取液的吸光度值相当含组胺质量,μg;m1:取样量,g;v1:HClO4溶液浸提试样的体积,mL;v2:样品经HClO4溶液浸泡、振荡、离心后,从上层清液中吸取的体积;9:第一个9是加入正戊醇的体积,mL、第二个9是加入(1+11)HCl溶液的体积,mL;2:第一个2是吸取正戊醇提取液的体积,mL、第二个2是吸取(1+11)HCl提取液的体积,mL。

2 结果与讨论

2.1 试样提取试剂的选择

GB5009.208-2016中用三氯乙酸提取液浸泡样品,但三氯乙酸极易潮解变成液态而影响使用,本文选用5%~10%的HClO4溶液代替三氯乙酸溶液浸泡鱼样[4],在样品中加入组胺标准溶液做回收率试验,组胺添加浓度为3.6mg/100g,回收率结果见表1[2]。

表1 不同浓度提取液的回收率试验结果(n=6)Tab.1 Recovery test results of different concentrations of extract(n=6)

由表1可知,溶液HClO4含量分别为5%、8%和10%时,提取回收率均在90%以上,说明提取效果比较理想,考虑到HClO4是强酸,浓度高、腐蚀性强,故本文选用5%的HClO4溶液作为样品提取液。

2.2 HClO4提取液、偶氮显色反应酸碱度的控制

用正戊醇提取HClO4提取液中的组胺时,HClO4提取液必须用NaOH溶液调pH值至碱性在10~12之间[1],以便于组胺能游离而被正戊醇提取。

组胺与偶氮试剂反应必须在弱碱性条件中进行,且反应时间必须控制在10min[1],若酸碱度控制不当,过酸时部分组胺与酸反应,组胺减少,则与偶氮试剂反应后导致结果偏低;过碱时,偶氮试剂的量会减少,也会导致结果偏低,只有在弱碱条件下,组胺与偶氮试剂方可完整反应,结果才会准确。

2.3 振荡方法和提取次数的选择

GB5009.208-2016中采用分液漏斗手动振摇方法来提取待测组份,手动振荡每次只能振荡两个样品,工作效率低,本文用50mL塑料离心管代替分液漏斗,手动振摇改为电动振摇,电动振荡一次可同时处理数十个样品,振荡充分,提取效率高。GB5009.208-2016中用正戊醇和(1+11)HCl溶液分别提取样液中待测组分时,每次3mL,共3次,这种提取方法步骤多,操作繁琐,本法用9mL正戊醇和9mL(1+11)HCl溶液各提取待测组份一次,该方法步骤少,节省检测时间[3],本文用GB5009.208-2016法与本法同时对鱼罐头进行组胺测定,结果见表2。

表2 GB5009.208-2016法与本法检测样品中组胺结果(n=6)(mg/100g)Tab.2 Results of histamine by GB5009.208-2016 and this method(n=6)(mg/100g)

由表2可知,本法的提取效果优于GB5009.208-2016法,本法省时省力,可同时处理多个样品。

2.4 方法的线性范围及检出限

在本实验条件下,组胺含量在0~20μg/10mL范围内呈现良好的线性关系,相关系数γ=0.9999,线性方程Y=0.007275X+0.0211。测定11个样品空白溶液的吸光度,计算其标准偏差,方法的检出限为0.121μg·mL-1。

2.5 方法的精密度试验

用3种鱼罐头做精密度试验,相对标准偏差为2.74%~5.23%,结果见表3。

表3 样品精密度试验结果(n=6)Tab.3 Sample precision test results(n=6)

2.6 方法的准确度

采用标准物质法,分别称取2.5g鲐鱼标准物质6份,按1.2.2方法同法处理,按1.2.3方法测定吸光度,计算组胺含量,测得的组胺含量为44mg/100g,国家标准物质的参考值为(452.8±64.9)mg·kg-1,可见方法具有较好的准确性。

2.7 样品测定

称取各类海鱼罐头10g,按试验方法测定组胺含量,同时加入1000μg·mL-1磷酸组胺标准溶液0.36mL(含360μg组胺)进行加标回收试验,加标回收率为92.2%~96.7%,结果见表4。

表4 样品测定及回收率试验结果(n=6)Tab.4 Sample determination and recovery test results(n=6)

3 结论

本文用5%的HClO4溶液代替国标方法中三氯乙酸溶液浸泡鱼样,手动振摇改为电动振荡将样品中的组胺浸提出来,正戊醇、(1+11)HCl溶液振荡提取待测组份各一次,该方法的精密度和准确度均符合检测要求,操作方便,工作效率高,可同时检测大批量样品中组胺含量。

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