东莞地区儿童呼吸道病毒感染流行特征分析

邓沛汶 潘俊均 修宁宁 隋 洪（通讯作者）

（东莞康华医院检验科，广东 东莞 523000）

随着抗生素的发展和临床的广泛使用，在儿童急性呼吸道感染（Acute respiratory infection，ARI）中由病毒引起感染的比例明显高于细菌感染[1]。同时已有报道，引起呼吸道感染的病毒中可在不同区域和季节呈现一定的差异[2]。通过对儿童在一年四季中感染呼吸道病毒的主要类型进行研究，可及时了解到本地区儿童呼吸道病毒感染情况，不仅给临床提供诊断依据，同时可提前对该种病毒进行预防以减少感染，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：收集本院儿内科和新生儿科2019年1月至2019年12月因呼吸道感染而住院儿童3953例，其中男孩2404例，女孩1549例。一年四季分组如下：春季公历3～5月，夏季公历6～8月，秋季公历9～11月，冬季公历11月～次年2月。

1.2 仪器与试剂：奥林巴斯BX51 荧光显微镜，试剂盒Diagnostic Hybrids 7 项呼吸道病毒检测试剂盒。

1.3 方法

1.3.1 标本采集与处理：经培训后由护士对当天入院儿童进行采集标本，采样耗材使用美国进口绒植拭子从鼻孔进入后水平深入到鼻咽部顺时针旋转一圈后取出拭子装进配套管中迅速送检。标本接收后立即加入3mL 1X PBS 细胞保存液。

1.3.2 细胞玻片准备：将加了细胞保存液的标本放置涡旋振荡器上充分震荡10 秒，使绒植拭子上细胞脱落，用镊子取出拭子丢弃，500g 离心5min，吸弃上清液，重复以上步骤洗涤2 次。在沉淀中加入500mL 细胞保存液反复吸吹以悬浮细胞层。每孔吸取25uL 加到8 孔玻片，小心放到40℃加热板中烘干。待玻片全干后，放入预先冷却丙酮中浸泡7min，进行固定细胞。

1.3.3 免疫荧光染色：试剂盒中七种试剂分别滴一滴约25uL 到每一个孔中，留一孔不加任何试剂作为空白对照，将玻片放入黑色盒中放到37℃培养箱中孵育20min。40X PBS 洗涤液小心冲洗，再用反渗水冲洗一次，放到加热板中烘干。滴上封闭油，盖上盖玻片，在暗房里使用荧光显微镜观察，显微镜的激发峰490nm，发射峰为520nm。

1.3.4 结果判断：每批次使用试剂盒配套的质控片，与标本同样处理。200 倍显微镜下观察，每孔中每视野找到≥2 个绿色荧光细胞即为阳性，否则为阴性。阳性细胞可被相应的FITC 荧光素标志的单克隆抗体识别，在细胞核和（或）细胞质呈现果绿色荧光，FluA、FluB 为胞核型或胞浆型，ADV 为颗粒样的胞浆型、RSV 是胞浆型、PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ为胞浆型，阴性细胞被Evans Blue 染成红色。

1.4 统计学处理：运用SPSS12.0 软件包处理数据，率的比较采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 七种病毒的检出情况：在3953例患儿中七种病毒总检出率是29.70%，男孩检出率29.95%，女孩检出率29.31%，两组差异比较无统计学意义（χ2=0.185，P=0.667），详见表1。

表1 七种呼吸道病毒的检出情况

2.2 不同季节病毒的检出情况：四个季度中春季检出率28.35%，夏季检出率24.80%，秋季检出率57%，冬季检出率44.79%，不同季节检出率比较，差异有统计学意义（χ2=146.038，P＜0.05），详见表2。

表2 不同季节呼吸道病毒的检出情况

3 讨论

在儿科里，由呼吸道病毒引起的ARI 很常见，而且ARI 也是引起婴幼儿死亡的主要原因之一。有报道[3]，在儿童中由病毒引起呼吸道感染占70%～80%。目前，引起ARI 最常见病毒类型有腺病毒（ADV）、甲型流感（FluA）、乙型流感（FluB）、副流感1 型（PIVⅠ）、副流感2 型（PIVⅡ）、副流感3 型（PIVⅢ）、合胞病毒（RSV）。呼吸道病毒的检出方法有多种，病毒的分离培养是诊断的“金标准”，本实验使用的直接免疫荧光法已广泛在临床试验室使用。

本研究主要收集东莞本地区2019年1月至2019年12月因呼吸道感染而入院的患儿共3953例，7 种呼吸道病毒的总检出率为29.70%。本研究中3953例患儿在四个季节中阳性检出率比较差异有统计学意义，其中冬季的检出率最高（44.79%），秋季最低（20.57%）。冬季的主要检出类型是FluA占冬季总检出率51.80%，其次是RSV 占32.61%。流感病毒属正粘病毒科，有A、B、C 三种类型，A 型可引起大范围的疾病传播。流感病毒的感染有明显的季节性，FluA 主要发生在冬季，易感人群集中在1～3岁。

不同地区儿童感染呼吸道病毒类型有差异，本地区儿童感染病毒的高发季节是冬、春季，主要人群为＜3岁的小龄儿童，RSV 主要感染病毒类型，1～3岁年龄阶段感染率最高，3～12岁随着年龄增长，感染率降低。随着社会环境改变，居住条件不同，人口迁移、一年四季环境气候等多种因素，儿童感染呼吸道病毒类型的改变也会有一定改变，定期对儿童呼吸道病毒感染类型数据进行统计分析，可加深对本地区病毒流行特点的了解与认识，可给临床提供及时准确诊断依据，从而给予患儿及时有效的治疗，为患者争取做到早期诊断，早期治疗，同时也有助于防止抗生素的滥用[4]，减少患者医疗负担、监控疾病的大规模感染。