草鱼IL-10单克隆抗体的制备与鉴定

刘 琴 贾 钊 陈康勇 朱晓真 王梓璇 陈 静 王俊亚李耀国 肖调义 邹 钧

(1.上海海洋大学水产与生命学院, 上海 201306; 2.湖南农业大学湖南省特色水产资源利用工程技术研究中心, 长沙 410128)

白细胞介素(Interleukin, IL)10是IL-10家族成员之一, 最初被称为细胞因子合成抑制因子(Cytokine synthesis inhibitory factor, CSIF)[1], 主要由2型先天淋巴细胞(Type 2 innate lymphoid cell, ILC2)和辅助性2型T细胞(T helper 2 cell, Th2)分泌, 具有广泛的免疫调控作用[2], 能够抑制1型辅助性T细胞(T helper 1 cell, Th1)分泌干扰素γ(Interferon gamma,IFN-γ)。此外, IL-10也可由B细胞、嗜酸性粒细胞、单核/巨噬细胞、树突状细胞、上皮细胞和肿瘤细胞等多种细胞产生[3,4], IL-10的细胞来源很大程度取决于刺激物引发的免疫反应强度和作用的部位[5]。

2003年, Zou等[6]首次在红鳍东方鲀(Fugu rubripes)基因组中发现il-10基因。此后,il-10在虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、斑马鱼(Danio rerio)、大西洋鲑(Salmo salar)、黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)、海鲈(Dicentrarchus labrax)、鲤(Cyprinus carpio)和金鱼(Carassius auratus)等多种硬骨鱼类中被克隆[7—16], 鱼类il-10基因结构与哺乳动物相似,具有5个外显子, 4个内含子, 鱼类跟哺乳类IL-10氨基酸序列同源性可高达80%—90%, 均含有由4个保守半胱氨酸形成的两对二硫键, 另外, 鱼类IL-10还额外存在两个保守的半胱氨酸。生物信息学分析显示, 鱼类IL-10可能以非共价键连接形成同源二聚体与受体结合, 激活JAK/STAT信号通路, 调控靶基因表达[6,8,11—15]。与哺乳类相比, 鱼类IL-10功能的研究较为有限。Pinto等[11]发现海鲈在腹腔注射紫外灭活的发光细菌(Photobacterium damselaessp.piscicida)后头肾及脾脏il-10表达量显著升高。Grayfer等[16]对IL-10的功能进行了较深入的分析, 发现金鱼IL-10能够抑制嗜水气单胞菌(Aeromonas salmonicida)诱导的tnf-α、il-1β、il-10等细胞因子表达, 此外, 金鱼IL-10还能抑制IFN-γ诱导的超氧阴离子产生, 这与哺乳动物中IL-10抑制炎症的功能类似, 表明鱼类IL-10功能具有保守性。……