高效液相色谱法分析15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳剂的有效成分

王 进，张青华，刘雪芬，潘光飞，廖文斌

(浙江禾本科技股份有限公司，浙江 温州 325008)

甲氰菊酯是一种拟除虫菊酯类杀虫、杀螨剂，具有触杀、胃毒和驱避作用，无内吸、熏蒸作用，作用于昆虫神经系统，与钠离子通道相互作用，破坏神经元功能，用于防治多种螨虫(锈螨除外)和害虫；噻螨酮是一种新的噻唑烷酮类杀螨剂，对螨类具有良好的防效，具有触杀和胃毒作用，有很好的穿透活性，具有杀卵、杀幼虫、杀蛹活性，对果树(包括柑橘、蔬菜、葡萄和棉花)的多种植食性螨的幼虫和卵有效[1-2]。

甲氰菊酯和噻螨酮的复配制剂目前国内比较少，这两者的复配对柑橘全爪螨的田间药效效果更佳[3]。甲氰菊酯和噻螨酮两者的复配制剂产品的分析方法也有相关报道[4]。液相色谱法是一种比较快捷、稳定性好、分离效果好的广谱分析方法，C18填料色谱柱，通用广谱。本文采用通用的反相液相色谱法，使用分析快速的 150 mm ODS反相柱和普通紫外检测器，对试样中甲氰菊酯和噻螨酮的含量进行了同时快速地分析。该方法同时应用于甲氰菊酯原药、噻螨酮原药，以及其单独或复配相关制剂产品的分析，且简便、快速、准确度高、重现性好。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Agilent1260 Infinity II 高效液相色谱仪(美国Agilent公司); DAD 检测器(G7115A，美国Agilent公司); 色谱柱： VP-ODS不锈钢柱 4.6 mm×150 mm×5 μm(日本岛津)；分析天平：赛多利斯CPA225D型(德国Sartorius)，精度为 0.00001 g；超声波清洗器(PMI-300TD，PRIMA technology Group)；有机微孔滤膜：孔径 0.45 μm(MILEDT Technology Co.Ltd)。

甲醇(色谱纯，乐清亿邦仪器设备有限公司)、乙腈(色谱纯，乐清亿邦仪器设备有限公司)、新制超纯水、甲氰菊酯标样(w=98.6%，白色固体，上海市农药研究所)、噻螨酮标样(w=98.2%，白色固体，上海市农药研究所有限公司)、15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳剂(浙江禾本科技股份有限公司)。

1.2 色谱工作条件

流动相条件：等度洗脱V(甲醇)∶V(乙腈)∶V(水)=68∶10∶22；流动相流速：1.0 mL/min；柱温：室温(温差不大于 2 ℃)；测定波长：235 nm；进样量：5 μL；保留时间：甲氰菊酯约 22.0 min，噻螨酮约 16.0 min。

上述为该制剂产品液相色谱操作条件的典型操作参数，不同实验室可根据自身仪器特点，对上述参数作适当调整。甲氰菊酯、噻螨酮的标样液相色谱图见图1，复配制剂试样液相色谱图见图2。

1.噻螨酮；2.甲氰菊酯。图1 甲氰菊酯·噻螨酮混合标样液相色谱图

1.噻螨酮；2.甲氰菊酯。图2 15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳剂试样液相色谱图

1.3 测定步骤

1) 标样溶液的配制:准确称取 0.03 g 甲氰菊酯(精确至 0.00001 g)和 0.015 g(精确至 0.00001 g)噻螨酮标样于同一 50 mL 容量瓶中，加入约 40 mL 甲醇溶解，放入超声波振荡 3 min，然后用甲醇稀释至刻度，定容，摇匀。

2)试样溶液的配制:称取15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳剂试样 0.30 g(精确至 0.00001 g)于 50 mL 容量瓶中，加入约 40 mL 甲醇溶解，放入超声波振荡 3 min，然后用甲醇稀释至刻度，定容，摇匀，使用前用 0.45 μm 有机膜过滤。

3)测定：在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样直至相邻两针峰面积相对变化小于1.2%，再按照标样、试样、试样、标样的顺序进行上机测定。

4)计算：测量结束后，将测得的两针同一试样溶液的峰面积以及试样溶液前后两针标样溶液中甲氰菊酯(或噻螨酮)峰面积分别进行平均。试样中甲氰菊酯(或噻螨酮)质量分数w(%)按式(1)计算：

式中：A1为标样溶液中甲氰菊酯(或噻螨酮)峰面积的平均值；A2为试样溶液中甲氰菊酯(或噻螨酮)峰面积的平均值；m1为甲氰菊酯(或噻螨酮)标样质量(g)；m2为试样质量(g)；w1为标样中甲氰菊酯(或噻螨酮)的质量分数(%)。

2 结果与分析

2.1 液相色谱条件的选择

甲氰菊酯和噻螨酮的紫外光谱图如图3、图4。

图3 甲氰菊酯的紫外吸收

图4 噻螨酮的紫外吸收

由图3、图4中可知，甲氰菊酯和噻螨酮在 235 nm 附近均有较强的吸收，在该波长附近避免了助剂的干扰，也避免了低波长下的溶剂峰干扰，能够满足分析的要求，故将检测波长确定为 235 nm。

色谱柱选择为常用的VP-ODS反相柱及C18柱。并且用 4.6 mm×150 mm×5 μm 柱，分离效果好，分析时间短，同时考虑到甲氰菊酯和噻螨酮物化性质和溶剂的紫外吸收波长的干扰等问题。用甲醇作为溶剂，成本低，该波长干扰少，并以甲醇、乙腈和水作为流动相，将其按不同比例进行测试试验。结果显示，当V(甲醇)∶V(乙腈)∶V(水)=68∶10∶22时，在流速 1.0 mL/min 条件下，与助剂能有良好的分离效果，并且峰型好，峰纯度测试符合要求。

2.2 分析方法的线性关系测定试验

按照1.3的试样溶液的制备方法，分别称取6个不同质量的甲氰菊酯和噻螨酮标样，配制成不同质量浓度的甲氰菊酯和噻螨酮系列标样溶液。以甲氰菊酯(或噻螨酮)对应的峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，然后得到两者的线性相关曲线。其中，甲氰菊酯的线性方程为y=5515977.8934x-50403.7770，相关系数r=0.9999，r>0.99；噻螨酮线性相关方程为y=9752577.1468x-13389.0777，相关系数r=0.9999，r>0.99，因此均在线性范围内。见图5和图6。

图5 甲氰菊酯的线性关系图

图6 噻螨酮的线性关系图

2.3 分析方法的精密度测定试验

按照1.2的色谱条件，对同一批次水乳剂试样做6次重复测定试验，结果表明，甲氰菊酯测定结果的标准偏差为0.030%，相对标准偏差(RSD)为0.29%，重复性测定结果小于0.67×2(1-0.5×lgC)(1.88)(修订后Horwits公式)；噻螨酮测定结果的的标准偏差为0.019%，相对标准偏差(RSD)为0.40%，重复性测定结果小于0.67×2(1-0.5×lgC)(2.12)(修订后Horwits公式)；结果表明(表1)，同一批次产品的检测结果重复性良好，能够满足日常检测工作的需要。

表1 分析方法的精密度试验结果

2.4 分析方法的准确度测定试验

分别称取5个水乳剂的制剂空白 0.25 g(精确至 0.00001 g)，置于 50 mL 容量瓶，然后分别加入 0.03 g(精确至 0.0001 g)的甲氰菊酯标样和 0.015 g(精确至 0.00001 g)的噻螨酮的标样，加入约 40 mL 甲醇溶解，放入超声波振荡 3 min，然后用甲醇稀释至刻度，定容，摇匀，使用前用 0.45 μm 有机膜过滤。在上述色谱条件下进行分析，分别测定甲氰菊酯和噻螨酮的质量，根据添加标样量计算其回收率。结果显示(表2)，甲氰菊酯的平均回收率为99.5%和噻螨酮的平均回收率为99.6%，均符合回收率标准范围98%～102%。

表2 分析方法准确度测定试验结果

3 结论

本方法特异性好，线性关系良好，实验方法精密度较高，准确度及回收率符合要求。采用本方法测定15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳剂中有效成分质量分数结果可靠，并且干扰少，准确度高，便于生产中大批量试样的测定，是一种可行的分析方法。