左乙拉西坦缓释片制备工艺研究*

杨 鑫，杨广德，张继业，徐 晶

（1.西安交通大学第二附属医院，陕西 西安 710004；2.西安交通大学医学部药学院，陕西 西安 710061；3.陕西省人民医院，陕西 西安 710068）

我国癫痫总体患病率7.0‰，年发病率28.8/10万，每年新增癫痫患者40 万，其在我国已成为仅次于头痛的第二大常见病［1-2］。左乙拉西坦（LEV）属吡咯烷酮衍生物，主要用于治疗局限性及继发性全身性癫痫［3-5］，高效低毒，口服吸收快且安全，生物利用度几近100%，其药物代谢动力学（简称药代动力学）分布与抗癫痫药物理想的动力学分布模型相似［6-7］。2008 年美国批准UCB 公司的左乙拉西坦缓释片（levetiracetam，Keppra XRTM）上市。2006 年11 月原国家食品药品监督管理局（SFDA）批准进口LEV。目前国内仅原研产品在售，LEV原料药成本较低，因此，其缓释片的仿制药在国内具有广阔的应用前景。本研究中参考相关文献、UCB公司在美国上市申请的专利、《美国药典》（USP32-NF27）及《欧洲药典》（EP8.0）关于LEV 质量标准的规定，拟研制以羟丙甲基纤维素（HPMC）为骨架材料、与Keppra XRTM的释药行为相似的LEV 缓释片（规格为每片500 mg），且所建制备工艺需简单易行，适合大规模生产，以为国产LEV缓释片的开发提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱系统（含SPD -10Avp 型紫外检测器、LC-10ATvp，LC-Solution 色谱工作站）、AY120 型电子天平（日本Shimadzu 公司）；ZRS -8G 型溶出度测试仪、YD -I 型片剂硬度测试仪、CS -2 型脆碎度测试仪（天津市鑫洲科技有限公司）；DP -30A 型单冲压片机（北京国药龙立科技有限公司）；TD 型电子天平（余姚市金诺天平仪器有限公司）；电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；PHS -29A 型pH 计（上海雷磁创益仪器仪表有限公司）；KH5200 型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；CH-10 型槽型混合机、YK-160 型摇摆式颗粒剂（上海天和制药机械有限公司）；HPX -250B 型恒温恒湿箱（上海悦车仪器仪表有限公司）。

1.2 试药

LEV原料药（北京师宏药物研制中心）；LEV对照品（美国国家标准局）；左乙拉西坦酸对照品（北京百灵威科技有限公司）；左乙拉西坦缓释片（比利时UCB 公司，商品名开浦兰）；HPMC（上海卡乐康公司，黏度类型包括K4M、K15M、K100M）；滑石粉（广西龙胜华美滑石开发有限公司）；硬脂酸镁、二氧化硅（浙江湖州展望药业）；聚乙烯吡咯烷酮K30（PVPK30，西安富力化学厂）；无水乙醇（广东省化学试剂工程技术研究开发中心）；乙腈（天津市科密欧化学试剂有限公司）；硫酸（北京化工厂）；磷酸二氢钾、氢氧化钠（广东光华化学厂有限公司）；氢氧化钾（中国化学试剂三厂）；异丙醇（美国TEDIA公司）；正己烷（美国Tedia公司）。

2 方法与结果

2.1 处方筛选

粘合剂选择：称取500 mg 左乙拉西坦原料药和200 mg HPMC K15M，混匀后加入不同的粘合剂（85%乙醇、5%PVP溶液、10%PVP溶液、90%乙醇、95%乙醇）制软材，过筛制颗粒，烘干，整粒后将干颗粒与5 mg二氧化硅、10 mg 硬脂酸镁混匀、压片，制备样品缓释片。原研片质量为（715 ± 15）mg，平均硬度为23，而两种PVP 溶液作为粘合剂制备得到的样品片剂硬度值均小于12，不符合要求；90%乙醇溶液制备得到的样品片剂硬度大于18，同时片剂表面光滑无斑点，可压性好，故选择90%乙醇溶液作为粘合剂［8］。

缓释材料选择：称取500 mg 左乙拉西坦原料药和200 mg 不同黏度HPMC［9］，分别混匀后加入90%乙醇制软材，过筛制颗粒，烘干，整粒后将干颗粒与5 mg二氧化硅、10 mg 硬脂酸镁混匀、压片，制备样品缓释片，溶出曲线见图1 A。可见，随着HPMC 黏度的增加，药物溶出度呈逐渐降低趋势。K4M 溶出较快，8 h 时即基本释放完全，与原研片溶出曲线的相似因子（f2）值为60.06（＞60 为相似性较好），但与12 h 缓释的实验目的不符；K100M 和K15M 在前期溶出与原研片的溶出量差距较大，其12 h溶出曲线与原研片溶出曲线的f2值均小于60［10］。故考虑单用1 种缓释材料不能很好控制LEV的12 h 有效释放，采用不同配比的HPMC K15M 及HPMC K100M作为混合缓释材料。结果配比为7∶3、8∶2、9∶1（m/m）时的f2值分别为78.61，68.5，65.9，可见，以7∶3 为配比的混合缓释材料溶出曲线与原研片的溶出曲线相似度最高，12 h溶出释放效果最理想，故选择。溶出曲线见图1 B。

图1 溶出曲线A.Samples prepared by a single sustained-release material and original tablets B.Samples prepared by sustained-release materials with different ratios and original tabletssFig.1 Dissolution profiles

2.2 工艺筛选

制片方法：预试验考察了粉末直接压片法和湿法制粒压片法对药物释放的影响。湿法制粒压片法制得的样品片剂表面光滑，质量为（720 ± 25）mg，且硬度值大于22，形状与原研片接近；粉末直接压片法制得的片剂可压性差，片剂外表面光滑性较差，易松散，且制得的片剂质量差异较大，含量均匀度不如湿法制粒压片。故选用湿法制粒压片法。

筛网大小：根据常用筛网大小和文献［11］，按处方湿法制粒后分别过16 目和24 目筛，烘干后制备样品片剂。两种筛网制得的样品片剂在质量、硬度及药物释放方面无明显差异，但24目筛所得样品片剂表面更光滑、色泽更均匀。故选择24目筛。

压片压力：一般通过控制片剂硬度来控制压片压力的大小。根据原研片的硬度和缓释制剂常见硬度［12］，根据处方湿法制粒并干燥后考察，压力为7 N 时，制得的样品片剂表面光泽度较差，且有斑点出现，硬度值小于12，而压力为8 N 及9 N 时，样品片剂外观无明显差异，但以9 N 压力压制样品片剂的硬度及质量均匀度与原研片更接近。故选择压片压力为9 N。

2.3 中试样品制备

按处方量1 万片称取LEV 原料药粉末及选定的混合缓释材料粉末，在槽型混合机中混匀，平行3 个批次（批号分别为20120209，20120210 -1，20120210 -2），按每片消耗约0.8 mL 90%乙醇制备软材，使用摇摆式制粒机制成湿颗粒，放入真空干燥箱中70 ℃干燥3 h，取出，整粒。称取处方量的二氧化硅、硬脂酸镁和滑石粉粉末混合后，与整粒后的颗粒混匀，调节好压力（9 N）及填充量后用单冲压片机压片。压片得到的样品片剂使用欧巴代包衣液包衣后进行包装放置，即得中试样品片剂3万片。

2.4 中试样品片剂质量检查

硬度测定：取3 批中试样品片剂各10 片，使用硬度仪测定中试样品片剂和原研片的硬度值（长端）。结果3 批次中试样品片剂硬度值与原研片接近，RSD均小于4.0%（n=10），符合检查标准。详见表1。

表1 中试样品片剂硬度测定结果（n=10）Tab.1 Results of the hardness test of pilot sample tablets（n=10）

质量差异：取3 批中试样品片剂各20 片，精密称定总质量并计算平均片质量，再分别精密称定各片的质量。比较每片质量与平均每片质量，超出质量差异限度的片剂不得多于2片，且不得有1片超出限度1倍。结果3 批中试样品片剂质量差异小（RSD均小于2%），符合检查标准。详见表2。

表2 中试样品片剂质量差异测定结果（n=20）Tab.2 Results of the determination of weight difference of pilot sample tablet（n=20）

脆碎度测定：按2015 年版《中国药典》片剂脆碎度检查法检查。取3 批中试样品片剂各10 片，称定初始质量，吹去脱落粉末，精密称定质量，置脆碎度检查仪圆筒中，25 r/min转动4 min；取出，同法除去粉末，精密称定质量，计算减失的质量，观察片剂本身有无断裂、龟裂及粉碎。详见表3。

表3 中试样品片剂脆碎度检查结果（n=10）Tab.3 Results of the fragility assay of pilot sample tablets（n=10）

含量测定：取3批中试样品片剂各10片，精密称定，研成细粉，分别称取约72 mg，置50 mL 容量瓶中，加入40 mL流动相，超声（功率200 W，频率40 kHz，下同）处理20 min后，放至室温，用流动相定容，摇匀，经0.45 μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；取1 mL，置100 mL容量瓶中，用流动相定容，摇匀，作为自身对照溶液。取LEV 对照品和左乙拉西坦酸对照品适量，分别制成质量浓度为1 mg/ mL 的LEV 对照品溶液及质量浓度为0.78 μg/ mL 的左乙拉西坦酸对照品溶液，各取适量，进样测定，计算样品片剂中LEV 及左乙拉西坦酸的含量［13］。结果样品片剂中LEV 含量为98%～102%，左乙拉西坦酸含量小于0.3%，供试品溶液和自身对照溶液中未检测到杂峰。详见表4。

表4 中试样品片剂中左乙拉西坦及左乙拉西坦酸含量测定结果Tab.4 Results of content determination of levetiracetam and levetiracetamic acid of pilot sample tablets

溶出均一性考察：参照国家药品监督管理局药品审评中心局《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》，量取经脱气处理的溶出介质（pH 6.0 PBS）900 mL，置溶出杯，在溶剂温度（37 ± 0.5）℃，转速100 r/ min条件下，取同一批中试样品片剂6 片，分别投入6 个转篮，至1，2，4，6，8，12 h 时吸取溶出液1 mL（立即补加等温等量溶出介质）、经0.45 μm 滤膜滤过，取续滤液，进样测定，计算溶出液中LEV 浓度并计算该批制剂不同时间累计溶出度，结果的RSD均小于3%（n=6），详见表5。表明其批内均一性良好。

表5 中试样品片剂累计溶出率（%）Tab.5 Cumulative dissolution percentage of pilot sample tablets（%）

稳定性考察：取中试样品片剂适量，分别在高温（40 ℃、60 ℃）、高湿［相对湿度（RH）为75%、92.5%］和强光照［（4 500±500）lx］条件下贮存5 d 和10 d 时各取10 片，研成细粉，分别取3 份72 mg 粉末，置50 mL 容量瓶中，加入40 mL 流动相超声处理20 min，放至室温，加流动相定容，摇匀，经0.45 μm滤膜滤过，取续滤液进样测定。结果左乙拉西坦、左乙拉西坦酸含量均符合《美国药典》和《欧洲药典》标准（正常值分别为98%～102%，＜0.3%），表明样品片剂在高温、高湿、光照条件下稳定性良好。详见表6。

表6 样品片剂高温、高湿、光照条件下放置后含量测定结果（%）Tab.6 Results of content determination of sample tablets after placing under high temperature，high humidity and light conditions（%）

3 讨论

LEV 缓释片是比利时UCB 公司开发的抗癫痫新药，与传统抗癫痫药物相比，其药效好、安全性高、耐受性好，临床广泛应用［14-15］，但其作用机制尚未明确。LEV 缓释片可减少血药浓度的峰谷现象，从而提高药物的安全性；其次，LEV 缓释片使血药浓度在较长时间内维持在有效治疗浓度范围内，可降低给药频率，使用更方便。但该药也存在一些不足，如生产工艺较普通制剂复杂，需特别谨慎对待药物突然释放导致的中毒，不能灵活调节给药剂量和时间等［16］。

本研究结果显示，中试样品片剂质量差异及脆碎度检查符合2015 年版《中国药典（二部）》中有关规定，样品片剂的硬度与原研片相近。不同溶出介质中12 h溶出曲线与原研片溶出曲线的相似度符合要求，两者12 h 溶出度无明显差异。还发现，中试样品片剂中LEV含量、杂质含量及溶出度在加速和长期试验放置后稳定性良好。本研究中确立了自制缓释片剂处方及制备工艺和质量标准，对于国产LEV 缓释片的早日问世具有一定意义。