基于CRISPR/Cas9的PALM基因敲除约氏疟原单克隆虫株的构建

曹玉洁，张玲红，苗昱辰，卢 里，李春草，张 璐，胡 瑞，李江艳，夏 惠，陶志勇，方 强,

疟疾是危害严重的寄生虫病。据2021年世界卫生组织数据[1]显示，2020年全球疟疾病例2.41亿，较2019年增加1 400万。尽管我国自2017年起已无本土疟疾病例报告，且WHO于2021年6月正式宣布中国消除疟疾[2]，但输入性疟疾及疟疾再传播形势依然严峻[3]。传染病最理想的控制手段是有效的疫苗。尽管疟疾疫苗近年来已取得重大进展，首个疟疾疫苗获批上市，在撒哈拉以南非洲地区和中度至高度恶性疟原虫传播风险地区的儿童中使用[4]，但其保护率仍不理想，约30%[5]。疟疾疫苗研发仍亟需加强。疟原虫的致病仅由红内期疟原虫引起，红外期疟原虫并不致病，因而红外期是预防性疫苗研制的理想阶段。疟原虫减毒子孢子可诱发高效的保护性免疫[6]，但通过物理化学方法制备减毒子孢子不易进行质量控制。因此，遗传减毒子孢子疫苗是较为理想的疟疾预防性疫苗策略[7-8]，即针对疟原虫红外期特异性关键发育基因进行敲除，制备遗传性状稳定的减毒子孢子，子孢子感染宿主后，疟原虫发育停滞于红外期，可诱发机体保护性免疫。疟原虫红外期特异性关键发育基因敲除是制备遗传减毒子孢子疫苗的关键。由于疟原虫基因敲除较困难，故遗传减毒子孢子疫苗发展较为缓慢。随着CRISPR/Cas9技术在疟原虫领域的应用[9-10]，遗传减毒子孢子疫苗迎来新的发展机遇。近年来，部分仅在红外期疟原虫表达的发育关键基因如UIS[11-13]、P36[14]、P52[15]、SAP1[16-17]、Plasmei2[18]、Lisp2[19]等陆续被鉴定，并被应用于疟疾减毒子孢子疫苗研究。……