凝结芽孢杆菌对蛋鸡源肠炎沙门氏菌致病性的影响

夏立业

摘 要：为了研究凝结芽孢杆菌对蛋鸡源肠炎沙门氏菌致病性的影响，本试验选取80只7日龄雏鸡随机分为4组，每组20只。A组（对照组）和C组饲喂基础饲粮，试验组（B组和D组）在基础饲粮中添加2×108 cfu/kg凝结芽孢杆菌。连续饲喂7 d后，第 8天进行肠炎沙门氏菌攻毒，分别给C组和D组雏鸡灌服0.5 mL 6.25×107 cfu/只的肠炎沙门氏菌，而A组和B组灌服0.5 mL无菌PBS，感染后观察一周。试验开始后记录雏鸡不同时间点的体重变化，同时在各时间点采集盲肠内容物，进行菌落计数。结果显示，攻毒后C组和D组雏鸡的体重均出现下降情况，但D组雏鸡体重下降幅度较小，但同一时间点，四组雏鸡之间体重无显著差异（P>0.05）。在不同时间点，A组和B组雏鸡盲肠内容物中均未分离到肠炎沙门氏菌，而C组和D组雏鸡在感染后第1天开始即可分离出肠炎沙门氏菌，随着感染天数增加菌落数呈减少趋势，且D组的载菌量均显著低于C组的载菌量（P<0.05）。综上所述，凝结芽孢杆菌能够缓解肠炎沙门氏菌感染引起的雏鸡体重下降，并有效减少盲肠中肠炎沙门氏菌的载菌量。

关键词：凝结芽孢杆菌；肠炎沙门氏菌；蛋鸡源；雏鸡；致病性

中圖分类号：S816.7文献标识码：B文章编号：1673-1085（2023）05-0050-04

沙门氏菌感染是食物和水传播疾病的主要病因之一，也是世界范围内引起人类和动物公共卫生危害的主要原因。在20世纪早期，白痢沙门氏菌和伤寒沙门氏菌在美国和欧洲的家禽中流行，增加雏鸡死亡率，造成重大经济损失，因此，人们开始广泛开展防治这几类沙门氏菌感染的研究。然而，随着这些病原菌被控制或消灭，肠炎沙门氏菌（Salmonella enteritidis）变得更加普遍。自20世纪70年代末以来，肠炎沙门氏菌成为世界许多地区日益严重的食品安全问题[1]。

在饲料中添加益生菌可以减少致病菌在宿主肠道的定植从而有效控制食源性感染。凝结芽孢杆菌是经美国食品及药物管理局批准的一种“普遍认为安全”的杆菌类乳酸菌。研究证实，饲粮添加凝结芽孢杆菌对肉鸡生长性能有很好的改善作用[2]。然而关于凝结芽孢杆菌对肠炎沙门氏菌对雏鸡的致病性影响尚不清楚。本试验分析饲喂凝结芽孢杆菌肠炎沙门氏菌感染后雏鸡体重变化和盲肠内载菌量变化的影响，以期为肠炎沙门氏菌的防治提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 试验材料

肠炎沙门氏菌标准菌株（No. 21482）购于中国工业微生物菌种保藏管理中心。凝结芽孢杆菌（BC-3）分离自辽宁省某蛋鸡养殖场采集的蛋鸡粪便，并由本单位保存。雏鸡通过购置种蛋利用孵蛋器孵化后分别笼饲至7或12日龄用于动物试验。

1.2 肠炎沙门氏菌对雏鸡毒力的测定

将肠炎沙门氏菌于营养肉汤中复苏，连续传代三次，用无菌PBS将菌液梯度稀释后测定其浓度，然后稀释成107～109 cfu/mL三个连续的稀释度。雏鸡饲喂至12日龄，随机分为4组，每组20只，在禁食、禁水3 h后，按照1 mL/只口服接种不同浓度的肠炎沙门氏菌悬液，对照组接种相同剂量的无菌PBS，连续观察7 d，进行半数致死量（LD50）的测定[3]。

1.3 试验设计与饲养管理

选取7日龄雏鸡80只，随机分为4组，每组20只。A组（对照组）和C组饲喂基础饲粮，试验组（B组和D组）在基础饲粮中添加2×108 cfu/kg凝结芽孢杆菌。连续饲喂7 d后，第 8天进行肠炎沙门氏菌攻毒，分别给C组和D组雏鸡灌服0.5 mL肠炎沙门氏菌，剂量为LD50的四分之一，而A组和B组灌服0.5 mL无菌PBS，观察一周。

1.4 雏鸡体重变化

分别在饲喂试验开始后的第0、5、10和14天称量雏鸡重量，统计每组雏鸡的平均体重，绘制体重增长曲线。

1.5 雏鸡盲肠内容物中肠炎沙门氏菌计数

在肠炎沙门氏菌感染后的第1、3、5、7天，分别从每组随机选取3只雏鸡屠宰，无菌取出一部分盲肠内容物称重，置于1 mL灭菌PBS中，将样品充分震荡混匀后进行连续的10倍稀释，分别取103～107 cfu/mL五个稀释度的样品涂布琼脂培养基，37℃培养过夜，进行菌落计数，再统计每克内容物中的肠炎沙门氏菌数[4]。

1.6 统计分析

数据采用SPSS 22.0软件中GLM模型进行方差分析，同时以Duncan氏法做多重比较，P<0.05表示差异显著，P≥0.05表示差异不显著。

2 结果与分析

2.1 肠炎沙门氏菌对雏鸡的毒力测定结果

将连续梯度稀释后的肠炎沙门氏菌感染雏鸡后，连续7 d观察雏鸡精神状态、临床变化以及发病和死亡情况（见表1）。LD50根据改良Karber法计算，logLD50 = Xk-i （∑P-0.5），其中，Xk为各组中最大攻毒剂量的对数；i为相邻两对数剂量的差值；∑P为攻毒各组死亡率之和，经计算肠炎沙门氏菌对雏鸡的LD50为2.5×108 cfu/mL，按照LD50的四分之一剂量开展后续的雏鸡感染试验。

2.2 凝结芽孢杆菌对肠炎沙门氏菌感染雏鸡体重的影响

饲喂试验开始后第0、5、10 和14 天分别称量每组雏鸡的体重，计算平均体重后，绘制各组雏鸡的体重变化曲线。结果如图1所示，在试验开始后的几天时间，各组雏鸡体重均呈上升趋势。第8天开始感染试验，从第10天的体重结果可知，对照组（A组）和凝结芽孢杆菌饲喂组（B组）雏鸡体重仍呈上升趋势，但不如感染前明显，这可能是由于A组和B组雏鸡灌服无菌PBS对鸡产生一定的应激作用；感染后，肠炎沙门氏菌感染组（C组）和凝结芽孢杆菌保护组（D组）雏鸡的体重均出现下降情况，其中D组雏鸡体重下降幅度较小，但同一时间点，四组雏鸡之间体重无显著差异（P>0.05）。上述结果表明凝结芽孢杆菌可以减轻肠炎沙门氏菌对雏鸡体重的影响，能够对雏鸡起到较好的保护作用。

2.3 凝结芽孢杆菌对肠炎沙门氏菌感染雏鸡盲肠中载菌量的影响

肠炎沙门氏菌感染第1、3、5、7天分别取雏鸡盲肠内容物称重后稀释涂板，计算每克内容物中肠炎沙门氏菌数。如图2所示，A组和B组雏鸡盲肠内容物中未分离到肠炎沙门氏菌，而C组和D组雏鸡在感染后第1天开始即可分离出肠炎沙门氏菌，随着感染天数增加菌落数呈减少趋势。而在试验过程中的不同检测时间点，D组的载菌量均显著低于C组的载菌量（P<0.05），表明饲粮中添加凝结芽孢杆菌能有效减少肠炎沙门氏菌在雏鸡盲肠中的定植。

3 讨论

由于肠炎沙门氏菌可以在家禽的肠道中定植，家禽及其产品通常被认为是该致病菌感染的主要来源之一。凝结芽孢杆菌对酸和胆盐有很高的耐受性，能适应并定植宿主胃肠道，并通过产生乳酸而抑制致病菌的增殖，从而维护肠道健康，提升畜禽生产效益[5]。因此，本试验探究了在饲粮中添加凝结芽孢杆菌对肠炎沙门氏菌致病性的影响。从结果可知，凝结芽孢杆菌可以缓解雏鸡由于肠炎沙门氏菌感染造成的体重损失。鸡的盲肠是肠炎沙门氏菌的主要定植部位，鸡可以成为无症状的病原菌携带者。因此，盲肠和肠道内容物被认为是肉鸡生长期间和加工厂肠炎沙门氏菌污染的主要来源，盲肠的载菌量也是衡量机体抵抗肠炎沙门氏菌入侵能力最重要的器官。刘聪等[6]研究发现添加凝结芽孢杆菌可显著降低感染沙门氏菌蛋鸡的盲肠沙门氏菌拷贝数，并抑制沙门氏菌的定植，这与我们的试验结果相似。

4 小结

在本试验中，饲喂凝结芽孢杆菌能够缓解肠炎沙门氏菌感染引起的雏鸡体重下降并有效减少盲肠中肠炎沙门氏菌的载菌量，上述结果为凝结芽孢杆菌在肠炎沙门氏菌防控中的应用提供了理论依据。

参考文献：

[1] 王莎莎，刘丽英，吴桂贤，等.肠炎沙门氏菌接种对雏鸡免疫器官指数的影响[J].家禽科学，2015（12）：12-17.

[2] 朱凡，肖明霞，王乙茹，等.饲用凝结芽孢杆菌和丁酸梭菌对高温养殖肉鸡生长性能的影响.云南农业大学学报（自然科学），2022，07（06）：957-962.

[3] 崔璐璐，鞠孜敬，杨溢，等.丁酸梭菌影响肠炎沙门氏菌对SPF小鼠致病性的作用[J].微生物学报，2020，60（04）：769-779.

[4] 陈铖. 肠炎沙门氏菌不同感染途径对雏鸡的致病性及其对药物敏感性试验[D].福州：福建农林大学，2016.

[5] 赵树平，包维臣，高鹏飞，等．凝结芽孢杆菌的特性及研究进展[J]. 家畜生态学报，2014，35（2）：6-11+20.

[6] 刘聪，黄世猛，趙丽红，等. 凝结芽孢杆菌对感染肠炎沙门氏菌蛋鸡肠道形态、抗氧化能力及沙门氏菌定植的影响[J].中国农业大学学报，2019，24（01）：69-75.

Effects of Bacillus coagulans on the Pathogenicity of Salmonella enteritidis from Laying Hens

XIA Liye

（People's Government of Aqi Town in the suburb of Jiamusi City， Jiamusi  154012， China）

Abstract：  In order to study the effect of Bacillus coagulans on the pathogenicity of Salmonella enteritidis from laying hens， 80 chicks aged 7 days were selected and divided into 4 groups with 20 chicks per group. Chicks in group A （control group） and group C were fed a basal diet， while chicks in group B and group D were fed the basal diet supplemented with 2×108 cfu/kg Bacillus coagulans. After feeding One week， chicks in group C and group D were given 0.5 mL 6.25×107 cfu of Salmonella enteritidis， while chicks in group A and group B were given 0.5 mL of sterile PBS on d 8. The experiment last for one week after infection. The weight changes of the chicks were recorded at different time points. The chicks were killed at different time points after infection， and the cecal contents were collected for colony counting. The results showed that the weight of chickens in group C and group D decreased after challenge， but the weight of chickens in group D decreased slightly. However， there was no significant difference among the four groups at the same time （P>0.05）. At different time points， no Salmonella enteritidis was isolated from cecal contents of group A and group B， but Salmonella enteritidis was isolated from the first day after infection in group C and group D. The number of colonies in group D was significantly lower than that in Group C （P<0.05）. In conclusion， Bacillus coagulans could alleviate the weight loss caused by Salmonella enteritidis infection and effectively reduce the Salmonella enteritidis load in the cecum of chicks.

Keywords：  Bacillus coagulans; Salmonella enteritidis; Laying hens origin; Chicks; Pathogenicity