赤桉树蜂蜜对免疫功能低下模型小鼠的免疫调节作用

王丽霞 林韦康 陶春霖

免疫系統是机体执行免疫应答和免疫功能的重要系统，机体健康与免疫系统稳定运行息息相关。研究发现，在感染新冠肺炎死亡的患者中，多为免疫功能低下的老年人，因此提高自身机体抵抗力非常重要。

蜂蜜具有多种功能活性及健康益处，如抗氧化、抑菌活性、抗炎活性、免疫调节活性等。根据蜜源植物种类的不同，蜂蜜分为多种蜜种，其中桉树蜜的抑菌效果要优于一般蜂蜜。基于此，本文主要探索赤桉树蜂蜜（Fewsters Farm Jarrah Honey，FFJH）对免疫功能低下模型小鼠的免疫调节作用，以期为增强免疫低下人群的免疫功能及后疫情时代提高抗病能力提供营养支持。

一、材料与仪器

1.实验动物。C57BL/6小鼠，雄性，SPF级，个体质量为（20±2）g，6-8周龄，购买于北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证号为SCXK（京）2019-0008。在动物适宜条件下并可自由取食和喝水，喂养7d用于实验。

2.蜂蜜与试剂。赤桉树蜂蜜（FFJH），洋妆源（上海）网络科技有限公司；环磷酰胺（CTX），通化茂祥制药有限公司；IL-2 ELISA试剂盒、TNF-α ELISA试剂盒、IFN-γ ELISA试剂盒、血管紧张素转化酶2（ACE2）、ELISA试剂盒（LOT20200911A）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ），上海酶联生物科技有限公司。

3.主要仪器。XPR电子分析天平，梅特勒托利多科技（中国）有限公司；5804R型低温高速离心机，德国Eppendorf公司；DK-S24电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备公司；BIO-RAD680型酶标仪，美国BIO-RAD公司。

二、实验与方法

1.造模与给药。将实验小鼠随机分为7组，对照组、模型组、药物组（给药剂量参考张喜武的研究）、市售蜂蜜组以及FFJH低、中、高剂量组，每组10只。除对照组小鼠外，均一次性腹腔注射CTX 200mg/kg，对照组注射等体积生理盐水。药物组（人参提取液10mL/kg）、市售蜂蜜组（10g/kg）、FFJH低剂量组（1.25g/kg）、FFJH中剂量组（5g/kg）和FFJH高剂量组（10g/kg）均从第2天开始灌胃给药；对照组及模型组每天灌胃等体积生理盐水，连续灌胃14d。

2.标本采集与指标检测。（1）器官指数检测。给药结束后次日称量各组小鼠体质量，颈椎脱臼处死小鼠，解剖取出胸腺、脾脏、肺脏，除去血污，吸干表面水分后，放于电子分析天平上称重。计算公式如下：

器官指数=器官重量（mg）/体质量（g）

（2）血清细胞因子表达水平检测。眼球取血，在4℃、4500r/min条件下，离心10min，收集上层血清。血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α水平的测定，按照试剂盒操作说明书进行。

（3）肺组织匀浆液ACE2和AngⅡ表达水平检测。首先制备10%的肺组织匀浆液，取适量肺组织，加入9倍磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.4），匀浆后，在4500r/min条件下，离心10min收集上清，用蛋白定量后备用。ELISA操作按照试剂盒操作说明书进行。

3.统计学分析。数据分析使用GraphPad Prism v.8.0统计软件。组间分析使用One-way ANOVA或T-test进行分析。P＜0.01表示具有显著性差异。

三、结果与分析

1.FFJH对免疫抑制小鼠脏器指数的影响。如图1a所示，与对照组相比，模型组小鼠的胸腺指数显著降低（P＜0.01），模型建立成功；与模型组相比，药物组、FFJH高剂量组小鼠的胸腺指数均升高（P＜0.01），说明高剂量FFJH可以减缓小鼠胸腺的萎缩程度。

如图1b所示，与对照组相比，模型组小鼠的脾脏指数降低（P＜0.05）；与模型组相比，FFJH高、中、低剂量组小鼠的脾脏指数均有所升高，但差异性无统计学意义（P＞0.05）。

如图1c所示，与对照组相比，模型组小鼠的肺脏指数显著升高（P＜0.01）；与模型组相比，FFJH高剂量组的肺脏指数显著降低（P＜0.01）。

2.FFJH对免疫抑制小鼠血清细胞因子表达水平的影响。如图2a所示，与对照组相比，模型组小鼠血清中的细胞因子IL-2表达水平显著降低（P＜0.01）；与模型组相比，药物组和FFJH高、中剂量组小鼠血清中的细胞因子IL-2表达水平显著升高（P＜0.01）。

如图2b所示，与对照组相比，模型组小鼠血清中的细胞因子IFN-γ表达水平显著降低（P＜0.01）；与模型组相比，药物组和FFJH高、中剂量组小鼠血清中的细胞因子IFN-γ表达水平显著升高（P＜0.01）。

如图2c所示，与对照组相比，模型组小鼠血清中的细胞因子TNF-α表达水平显著升高（P＜0.01）；与模型组相比，FFJH高、中剂量组小鼠血清中的细胞因子TNF-α表达水平显著降低（P＜0.01）。

3.FFJH对免疫抑制小鼠肺组织匀浆液ACE2和AngⅡ表达水平的影响。如图3a所示，与对照组相比，模型组小鼠的肺组织匀浆液中ACE2表达水平显著降低（P＜0.01）；与模型组相比，FFJH高、中小鼠的肺组织匀浆液中ACE2表达水平显著升高（P＜0.01）。

如图3b所示，与对照组相比，模型组小鼠的肺组织匀浆液中AngⅡ表达水平显著升高（P＜0.01）；与模型组相比，FFJH高、中剂量组小鼠的肺组织匀浆液中AngⅡ表达水平显著降低（P＜0.01）。

四、结论与讨论

胸腺指数的变化直接反映机体细胞免疫水平的高低。IL-2、IFN-γ是具有调节机体免疫作用的细胞因子，也是评价机体细胞免疫功能状态的重要指标。血管紧张素转化酶2（ACE2）与非小细胞肺癌进展有关，ACE2还可以将肾素-血管紧张素系统中的AngⅡ降解成血管紧张素1-7，从而发挥抗炎、抗纤维化作用。ACE2活性功能受阻将导致AngⅡ升高，进一步诱导炎症因子（如IL-1β、IL-6、TNF-α）、趋化因子等多种物质的表达。

与模型组相比，小鼠按照FFJH低、中、高剂量给药后，高剂量组小鼠的胸腺指数、肺脏指数显著降低；FFJH高、中剂量组小鼠血清中的细胞因子IL-2表达水平显著降低（P＜0.01），IFN-γ表达水平显著升高（P＜0.01），TNF-α表达水平显著降低（P＜0.01）；FFJH高、中剂量组小鼠肺组织匀浆液中ACE2表达水平显著升高（P＜0.01），AngⅡ表达水平显著降低（P＜0.01）。实验结果表明，FFJH可能通过改善胸腺组织结构、调节炎症胞因子、调节肺组织AngⅡ的表达水平而影响环磷酰胺所致免疫缺陷小鼠的免疫功能。

作者简介：王丽霞（1986-），女，汉族，北京大兴人，大学本科，研究方向为功能性食品。