芪参益气滴丸调控Sirt1与eNOS互作促进糖尿病心肌缺血损伤修复再生

刘 鑫，刘甜甜*，姚魁武，张彦丽，巩 颖，顾媛媛，曹俊岭, 3*

芪参益气滴丸调控Sirt1与eNOS互作促进糖尿病心肌缺血损伤修复再生

刘 鑫1，刘甜甜1*，姚魁武2，张彦丽1，巩 颖1，顾媛媛1，曹俊岭1, 3*

1. 北京中医药大学东方医院，北京 100078 2. 中国中医科学院眼科医院，北京 100040 3. 北京中医药大学东直门医院，北京 100700

探讨芪参益气滴丸对糖尿病心肌缺血损伤小鼠血管内皮功能及血管新生的作用机制。102只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、尼可地尔片（4.55 mg/kg）组及芪参益气滴丸低、高剂量（227.5、455.0 mg/kg）组和芪参益气滴丸（227.5 mg/kg）＋EX-527（10 mg/kg）组。第2周开始对照组以正常饲料饲养，其余各组以高脂饲料饲养，然后持续7 d ip链脲霉素（50 mg/kg），建立2型糖尿病模型，对照组ip等体积生理盐水。第4周模型组和各给药组小鼠连续5 d颈背部sc异丙肾上腺素盐酸盐（100 mg/kg），对照组sc等体积生理盐水。第5周开始给予药物干预14 d，取血清测定心肌肌钙蛋白I（cardiac troponin I，cTn I）、肌酸激酶MB同工酶（creatine kinase-MB，CK-MB）、一氧化氮（nitric oxide，NO）、内皮素-1（endothelin-1，ET-1）和血管性血友病因子（von willebrand factor，vWF）含量；病理染色检测心脏形态结构、胶原纤维比值、心肌凋亡数量和血管新生情况；Western blotting检测心脏组织沉默信息调节因子1（silence information regulator 1，Sirt1）、内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）、磷酸化苏氨酸495位点eNOS（phosphorylation of Thr495-eNOS，pT495-eNOS）、磷酸化丝氨酸1177位点eNOS（phosphorylation of Ser1177-eNOS，pS1177-eNOS）蛋白表达。免疫荧光双标染色检测心脏Sirt1与eNOS共定位。与对照组比较，模型组小鼠血清cTnI水平及CK-MB活性均明显增加（＜0.01），ET-1、vWF和NO水平均显著减少（＜0.01）；心肌细胞排列紊乱，肌纤维缺失，肌间隙增大，心肌纤维化面积和心肌凋亡数目显著增加（＜0.01），血小板-内皮细胞黏附分子（platelet endothelial cell adhesion molecule-1，CD31）标记的新生血管数量明显减少（＜0.01），心脏Sirt1、eNOS表达降低（＜0.01），pT495-eNOS水平升高（＜0.01），Sirt1和eNOS共定位减少。……