大黄素对胰腺癌细胞5-甲基胞嘧啶表达的影响及对抑癌基因ppENK 去甲基化的作用

陈亮，唐坚，褚永权，叶剑宏，沈超，钱晓宇，姚旭枫

胰腺癌临床表现隐匿、早期诊断困难、容易发 生远处转移，是预后很差的消化系统恶性肿瘤之一，总体五年生存率约10%[1]。尽管手术切除是唯一可能的治愈手段，但由于早期症状不典型、易发生转移等特点，大部分胰腺癌患者就诊时已无法行根治性切除[2-3]。而且接受了手术治疗，其预后仍然不是十分理想。

大黄素具有抗菌、抗炎、免疫调节、抗肿瘤等作用，Liu 等[4]报道大黄素可通过多种途径抑制胰腺癌细胞的生长，起到抗癌作用，但其具体作用机制尚不清楚。DNA 甲基化是指在 DNA 甲基转移酶（DNMTs）的催化下，对CG 二核苷酸的胞嘧啶进行化学修饰，使其成为5-甲基胞嘧啶（5mc），DNMTs在肿瘤中的表达增强，引起高甲基化抑癌基因失活，最终促进肿瘤发生[5]。目前最常用的去甲基化药物主要包括核苷类似物地西他滨和5AzA-cdR，在低浓度下通过抑制DNMT 活性发挥去甲基化作用[6]。本文主要研究大黄素对胰腺癌细胞基因组5mc 的影响，及对抑癌基因ppENK启动子区CpG岛的去甲基化作用，探讨大黄素是否可以通过降低5mc 的表达来逆转ppENK 的甲基化状态，从而使其重新表达生物活性。

1 资料与方法

1.1 材料与试剂 大黄素、5AzA-cdR 购自sigma，CCK-8 试剂盒购自Gibco，细胞/组织基因组DNA提取试剂盒（离心菌株型）购自上海杰瑞生物工程有限公司，EpiTect®MSP 套件购自QIAGEN。

1.2 方法

1.2.1 细胞系和培养 本课题组引进并保存胰腺癌细胞系Panc1 细胞株，培养于胎牛血清、链霉素和青霉素的DMEM培养基中，37 ℃，饱和水分和5%CO2条件下生长，每2 ～4 d 换一次培养基，当生长到70%～80%时传代进行实验。……