OBSCN突变对于肝癌细胞增殖和迁移能力的影响

付琳琳 王 玉 赵雪梅

1. 山东第一医科大学（山东省医学科学院）药学院，山东 泰安 271016；2. 山东第一医科大学（山东省医学科学院）临床与基础医学院，山东 济南 250117

细胞骨架蛋白Obscurin（由OBSCN编码的蛋白）[1］是细胞内的分子支架，广泛分布于横纹肌、脑、肝、脾和肺等多种组织细胞[2］。有研究表明，OBSCN基因在乳腺癌和结直肠癌中表现了高度突变[3-4］。在乳腺癌患者样本中也观察到OBSCN基因突变率超过了15%[5］。原发性肝癌是我国目前发病率高、危害性大的恶性肿瘤之一[6-7］，临床有效治疗手段缺失[8-9］。本研究以人肝癌细胞HepG2为模型，构建过表达对照空载体HepG2 GL119细胞系、OBSCN过表达HepG2 H21157 细胞系、敲除对照空载体HepG2 ecas 细胞系和OBSCN敲除HepG2 OBSCN KO 细胞系，初步探究OBSCN突变对于肝癌细胞增殖和迁移能力的影响，为进一步探究OBSCN基因在肝癌发生发展中所起到的作用奠定了基础，为改善肝癌预后不良的现状提供了新的治疗思路。

1 材料与方法

1.1 材料

人肝癌细胞HepG2、MEM 培养基（武汉普诺赛生命科技有限公司），NonEssentialAmino、丙酮酸钠（美国GIBCO 公司），DMEM 培养基、胰蛋白酶消化液（山东思科捷生物技术有限公司），Polybrene（美国Sigma 公司），过表达对照病毒GL119（pSLenti-CMV-MCS-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE）、目 的 病 毒H21157[pSLenti-CMV-OBSCN（3 250 ~ 4 749bp，G1333R）-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE］（上海和元生物技术有限公司），DNA 引物合成与克隆质粒的序列测定（上海生工生物工程技术服务有限公司），BsmBI-v2（美国NEB 公司），Lipofectamine™ 2000 转染试剂（美国invitrogen 公司），嘌呤霉素（Solarbio），rTag PCR Mix、DNA琼脂糖凝胶纯化试剂盒、无内毒素质粒小提试剂盒（北京天根生化科技有限公司），OBSCN 抗体（Sigma），CCK-8 试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司），transwell小室（美国康宁公司）。

1.2 方法

1.2.1 荧光定量PCR 实验所用细胞均为处于对数生长期细胞，于37℃，5% CO2培养箱中培养，完全培养基配比为DMEM/MEM 培养基∶FBS 胎牛血清∶青链霉素= 9∶1∶0.1，细胞铺板前使用台盼蓝染液进行细胞计数。……