基于Hippo/YAP信号通路探究粉防己碱抗乳腺癌耐药机制

辛国松，王毛毛，侯妍秀，杨 燚，于 淼，季宇彬，李文兰，李海茹

基于Hippo/YAP信号通路探究粉防己碱抗乳腺癌耐药机制

辛国松1, 2，王毛毛1，侯妍秀1，杨 燚1，于 淼1, 2，季宇彬1, 2，李文兰1, 2，李海茹3*

1. 哈尔滨商业大学 药物工程技术研究中心，黑龙江 哈尔滨 150076 2. 国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，黑龙江 哈尔滨 150076 3. 哈尔滨医科大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150086

研究粉防己碱通过调控Hippo/Yes-相关蛋白同源癌蛋白（homologous oncoproteins Yes-associated protein，YAP）信号通路抗乳腺癌多重耐药的分子机制。采用CCK-8法检测粉防己碱对乳腺癌MCF-7/ADR细胞增殖的影响；采用倒置显微镜、荧光显微镜观察细胞形态；采用流式细胞仪检测细胞凋亡率；采用细胞集落实验检测细胞克隆形成能力；采用Transwell实验检测细胞侵袭能力；采用Western blotting检测细胞耐药外排蛋白[P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）、乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）、多药耐药相关蛋白（multidrug resistance associated protein，MRP）]，Hippo通路关键节点蛋白[YAP1、大肿瘤抑制激酶1（large tumor suppressor kinase 1，LATS1）、哺乳动物不育系20样激酶1（mammalian Sterile20-like kinase 1，MST1）、转录共活化因子（transcriptional co-activator with PDZ-binding motif，TAZ）]和凋亡关键蛋白[半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3，Caspase-3）、细胞色素C（cytochrome-C，Cyt-C）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）]表达。粉防己碱对MCF-7/ADR细胞具有增殖抑制作用，半数抑制浓度（half inhibitory concentration，IC50）值为14.20 μmol/L；粉防己碱能够改变细胞形态，部分细胞出现凋亡迹象；粉防己碱显著诱导MCF-7/ADR细胞发生凋亡（＜0.01），抑制细胞的增殖分化和侵袭能力，显著下调P-gp、BCRP、MRP1、YAP1、TAZ和Bcl-2蛋白表达（＜0.01），显著上调MST1、LATS1、Caspase-3、Cyt-C和Bax蛋白表达（＜0.01）。粉防己碱能够通过下调MCF-7/ADR细胞P-gp、BCRP和MRP1蛋白表达，抑制外排蛋白活性，增加细胞内粉防己碱含量蓄积；并通过激活Hippo信号通路，上调MST1蛋白表达，激活LATS1，进而调控下游靶点YAP1和TAZ表达，进一步上调Caspase-3、Cyt-C和Bax蛋白表达，下调Bcl-2蛋白表达，启动细胞凋亡程序，发挥抗肿瘤作用。……