安罗替尼对儿童T-急性淋巴细胞白血病细胞的抑制作用及机制研究

杨好好 岑梦姣 王佳萍

急性淋巴细胞白血病（acute lymphocytic leukemia，ALL）由骨髓、血液和髓外部位淋巴祖细胞的恶性转化和增殖引起，70%的患者为儿童[1]。虽然化疗药物治疗儿童ALL 有一定疗效，但引起的药物不良反应不容忽视[2-4]。因此，寻找靶标明确、更为低毒有效的治疗药物对提高患者的生存质量具有重大意义。安罗替尼具有抗肿瘤血管生成和抑制肿瘤生长的作用[5-6]，多种实体瘤的临床试验正在开展[7-8]。研究表明，安罗替尼通过抑制磷脂酰肌醇3 激酶（phosphoinositide 3 kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信号通路降低B 细胞-ALL（B cell-ALL，BALL）细胞的活力[9]。然而，安罗替尼是否具有其他潜在的靶点仍待阐明。Abelson 酪氨酸蛋白激酶1（Abelson tyrosine kinase 1，ABL1）是一种酪氨酸激酶，由于染色体易位形成断点聚集区域（breakpoint cluster region，BCR）-ABL1 融合基因，部分BCR 基因和ABL1基因融合成一个新的BCR-ABL1 融合基因，导致产生异常的蛋白激酶BCR-ABL1[10]。研究发现，靶向PI3K/PKB/mTOR 信号通路的药物在ABL1 融合阳性的细胞中具有更好的抑制效果[11]。因此，ABL1 可能是治疗ALL 的潜在靶点。本研究通过细胞实验及生物信息学分析，探讨安罗替尼在儿童T 细胞-ALL（T cell-ALL，T-ALL）中的潜在作用，并分析其作用机制，现将结果报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料和仪器 盐酸安罗替尼由正大天晴药业提供（规格：12 mg；批号：H20180004），儿童T-ALL 细胞CCRF-CEM 和J.gamma1（分别来源于3 岁11 个月和14岁患儿）购于浙江如耀生物科技有限公司，膜联蛋白V/碘化丙啶（annexin V/propidium iodide，Annexin V/PI）双染细胞凋亡检测试剂盒（批号：556547）购于美国BD公司，BCR-ABL1（批号：3009）、ABL1（批号：2862）、p-PKB（批号：4047）、PKB（批号：11848）、p-PI3K（批号：17366）、PI3K（批号：4255）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）（批号：5174），凋亡蛋白Caspase-3（批号：9662）、cl-Caspase-3（批号：9661）、cl-PARP（批号：5625）、Bax（批号：14796）、Bcl-2（批号：4223）抗体均……