食蟹猴B 病毒感染及其血液指标变化情况分析

2023-09-26 03:11黎湘娟唐艳霞韦莹陈立军
广西农学报 2023年4期
关键词:食蟹猴群血常规

黎湘娟 唐艳霞 韦莹 陈立军*

(1.广西卫生职业技术学院,广西 南宁 530023;2. 南宁海关技术中心,广西 南宁 530028)

猴B 病毒(B virus,BV),也称猕猴疱疹病毒Ⅰ型(Cercopithecine Herpesvirus Ⅰ),是一种人畜共患病原,BV 感染在猴群中非常多见,主要以食蟹猴和恒河猴为自然宿主,感染率在10%-60%之间[1],感染动物可传染给其他动物。猴群感染BV 后的症状并不明显,但是当人感染BV 后,会出现中枢神经系统疾病,严重者会导致死亡。2021 年4 月中国记载第1 例人感染BV 死亡病例[2]。BV 感染常成隐性感染,具有潜伏期长的特点,这不仅易导致猴群感染率增高,同时也增加从业人员或是实验人员感染的风险,因此对猴群开展BV 感染的检测对于猴群质量的监控以及保障相关从业人员的生命健康都具有十分重要的意义。血液学指标不仅是评估试验动物健康状况的监测指标,也是反应其生理、病理变化的重要参考指标。目前,有关食蟹猴BV 感染后血常规及血液生化的研究报道较少,在1997 年报道的患病食蟹猴病例中,提到白细胞减少和低蛋白血症[3]。国内研究曾对安徽恒河猴感染BV 后相关的血液检测指标进行比较[4],但研究的猴群及数量较有限。目前大部分猴的血常规及生化指标研究仅局限于健康猴群,故本研究旨在了解试验动物食蟹猴感染BV 的情况,对其血常规、生化指标进行测定,探讨感染BV 后引起血液相关指标变化的情况,为食蟹猴健康养殖提供参考。

1 方法

1.1 试验动物

2019 年9 月至2020 年5 月,采用随机抽样的方法,在广西试验猴养殖企业内随机采集食蟹猴血样本682 份。在食蟹猴清醒空腹状态下,在每只后肢静脉采血5 mL,其中抗凝血2 mL,用于血常规检测;非抗凝血3 mL,用于生化指标检测。

1.2 检测方法

1.2.1 猴BV 检测

采用斑点酶免疫法(DIA)检测猴血清BV 抗体。试剂盒由广州瑞姆生物科技有限公司提供,规格96 T。操作方法按说明书进行,判断标准为:病毒抗原点颜色与弱阳性对照颜色深度相同或更深,则判为阳性;若病毒抗原点颜色比弱阳性对照略浅,则判为可疑;若病毒抗原点无色或颜色很浅,判为阴性。可疑标本需进行重复性试验。若仍为可疑,则可判为阳性。

1.2.2 血常规检测

在采血后2 h 内,使用日本森美康医用电子有限公司的自动血液分析系统XN-10 对抗凝血学进行白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比容(HCT)、红细胞平均体积(MCV)、平均血红蛋白量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、淋巴细胞数(LYMPH)、淋巴细胞百分比(LYMPH %)、中性细胞数(NEUT)、中性粒细胞百分比(NEUT%)、单核细胞数(MONO)、单核细胞百分比(MONO%)、嗜酸性粒细胞数(EO)、嗜酸性粒细胞百分比(EO%)、嗜碱性粒细胞数(BASO)、嗜碱性粒细胞百分比(BASO%)、血小板(PLT)、血小板比容(PCT) 19 项指标的检测。

1.2.3 血清生化检测

将非抗凝血按3000 r/min 离心10 min 后,分离血清,采用贝克曼库尔特实验系统有限公司生产的全自动生化分析仪AU5800 进行丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、AST/ALT 比值、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、Y-谷氨酰基转移酶(GGT)、总胆红素(TBIL)、肌酐(CREA)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHOL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)14 项指标检测。

1.3 统计学分析

用SPSS 软件进行方差齐性检验,用t 检验及二分类logistic 回归进行分析,P <0.05 为有统计上的差异。

2 结果

2.1 一般生理情况

682 只食蟹猴的年龄在2~8 岁之间,平均年龄为3.48±0.85 岁;平均体重为2.6±0.56 kg,其中雄性337 只,雌性345 只。

2.2 BV 抗体检测结果

在采集682 只食蟹猴的血液样本中,BV 抗体阳性为66 只,总阳性率为9.68%。其中幼儿组(≤3岁)猴群的阳性率最低,其阳性率依次以年龄递增。不同年龄食蟹猴BV 抗体筛查结果见表1。

表1 不同年龄食蟹猴BV 抗体筛查结果

2.3 血液指标比较

66 只BV 抗体阳性的食蟹猴与616 只健康食蟹猴的血常规及血清生化等33 项血液指标相比,BV 阳性食蟹猴指标比健康猴群高的有ALT、AST、AST/ALT、TBIL、CREA、CHOL、HDL7项,其中TBIL 差异显著(P <0.05)。抗体阳性食蟹猴指标比健康猴群降低的有WBC、HGB、MCH、LYMPH、LYMPH%、MONO、MONO%、NEUT、NUET%、ALB、UA、TG、ALP、GGT、LDL15项,其中MONO 差异显著(P <0.05)。其余11 个检测项目在两者间没有差异。BV 抗体阳性与健康食蟹猴的血液指标对比情况见表2。

表2 BV 抗体阳性与健康食蟹猴的血液指标对比情况

2.4 二分类logistic 回归分析

将BV 抗体阳性作为因变量(1=阳性,0=阴性),将年龄、性别、体重及血常规、生化指标等33 个变量,通过二分类Logistic 回归分析显示,年龄和总胆红素对该模型具有统计学意义。年龄是猴群感染BV 的风险因子。BV 感染后,食蟹猴血清总胆红素显著升高。BV 抗体阳性食蟹猴与健康食蟹猴二分类Logistic 回归分析见表3。

表3 BV 抗体阳性食蟹猴与健康食蟹猴二分类Logistic 回归分析

3 讨论

BV 同人的单纯性疱疹病毒相近,猴群感染后呈疱疹样口炎的症状,一般于1-2 周内自愈;但人类感染B 病毒后可引起较严重的症状,产生致死性脑炎或上行性脑脊髓炎。既往流调结果显示,国内各地养殖场猴群BV 抗体阳性率为23.11%至55.6%。1994 年广东地区试验恒河猴BV 抗体阳性率为23.8%[5],2007 年该省某个养殖中心的恒河猴BV 抗体阳性率已上升至55.6%[6]。2010 年云南昆明灵长类研究中心人工饲养猕猴BV 抗体阳性率为23.11%[7]。2017 年安徽省实验猕猴阳性率为36.5%[8]。2003~2008 年来自中国7 个地区食蟹猴BV 抗体阳性率(43.49%)高于恒河猴(38.33%)[9]。不同地区养殖食蟹猴BV 阳性率也有不同的波动。1991~1996 年广西饲养食蟹猴BV 抗体阳性率为39.09%[10]。2007~2011 年柬埔寨的饲养食蟹猴阳性率为33.92%[11]。2008 年从马来西亚进口的野生食蟹猴BV 抗体阳性率高达68.5%[12]。本研究的人工饲养食蟹猴BV 抗体阳性率仅为9.68%,均低于之前的调查结果,与本研究前期抽查的结果一致[13]。国外研究者用PCR 方法在2009~2011 年对马来西亚392 只野生长尾猴进行检测,共检出154 只阳性猴,阳性率为39.29%[14]。泰国研究者于2020~2021 年对野生长尾猴常见传染病的病原进行检测,但未能监测到BV[15]。猴被BV感染后,一般终生携带抗体,抗体阳性代表猴已被感染或是曾被感染。

肝功能检查是反映肝脏生理功能的检测项目。猴感染BV 后,病毒在粘膜上皮细胞进行复制,形成初发感染,在临床症状出现之前有4-6 天的潜伏期,进而在皮肤内或局部如肝脏出现炎症病变。处在潜伏期的病毒可被激活,大量复制,引起继发性肝损伤或明显的皮肤病变[16]。抗体阳性食蟹猴的肝功能指标出现升高的有ALT、AST、AST/ALT、TBIL、CREA、CHOL、HDL7 项,尤其是AST/ALT的比值,均大于1。在血清检测中,反映肝功能损伤严重程度的是总胆红素和凝血功能,总胆红素越高,凝血功能越低,往往提示肝脏损伤越严重,有重型肝炎、肝坏死的倾向。本研究的总胆红素在两组比较中具有统计学意义,推测本研究的BV 抗体阳性食蟹猴肝功能损伤较严重。

血清总蛋白和白蛋白检测通常反映慢性肝损害状况,亦反映肝实质细胞的储备功能[16]。在本研究中,抗体阳性食蟹猴猴群的生化功能指标出现降低的有ALB、UA、TRIG、ALP、GGT、LDL等6项,提示阳性猴群中的肝脏合成及代谢功能可能出现障碍。但既往研究显示,感染BV 的恒河猴除AST、BUM、CHOL 3 项指标外,其他生化指标均高于健康恒河猴群[4],故推测检测结果是否与猴群种属的差异有关。

在既往研究中,单纯性疱疹病毒感染会引起人的转氨酶水平升高,同时伴有白细胞减少及血小板减少症[16]。本研究的猴群血常规指标仅出现白细胞群减少,其中单核细胞在两者比较中具有统计学意义,但并未出现血小板减少的现象。推测可能是B病毒入侵后,单核细胞为了转变巨噬细胞实行吞噬病毒的功能而迁移到组织,造成外周血单核细胞计数减少,进而导致抗体阳性猴群的体内免疫功能下降。反之,单核细胞减少可增加猴群复发感染的可能性。

本研究经Logistic 回归分析显示,年龄和总胆红素含量与食蟹猴感染BV 有显著相关性。BV 抗体阳性食蟹猴的平均年龄为3.84±1.04 岁,高于健康猴群(3.44±0.81 岁)。既往研究[7,12]表明,随着年龄的增长,猕猴、食蟹猴的BV 感染率越高,其阳性率与年龄呈正相关关系。本研究结果也验证了同样的趋势,幼儿组的食蟹猴抗体阳性率仅为7.17%,而大于4 岁的食蟹猴阳性率高达18.39%,提示年龄是食蟹猴感染BV的危险因素。感染BV后,猴的总胆红素明显升高,总胆红素是反映其病情变化势态的重要监测指标。

本研究初步探索BV 抗体阳性的食蟹猴与健康食蟹猴猴群之间血常规及血清生化指标的差异性,为相关的试验研究提供基础数据。将来仍需进一步的横断面及队列研究,探讨其病毒DNA 含量、病程对血液指标及免疫力影响的相关性研究。

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