平坝区鹅养殖场细菌感染情况调查

申茂恒,蒲 龄,田程程,代国滔,田宇杰,陈浩林*

（1.安顺市动物卫生监督所,贵州 安顺 561000；2.贵州省畜牧兽医研究所,贵州 贵阳 550005）

平坝区位于贵州省中部地区，地势平坦，水资源丰富，适合发展水禽产业，当地以平坝灰鹅、三花鹅、狮头鹅等品种为主，逐步形成了养殖、加工、销售的产业链［1］，成为该县实现乡村振兴的重要产业。随着肉鹅养殖密度的增加，免疫程序、消毒措施、粪污处理方式不当等因素，导致养殖场常见细菌如大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、魏氏梭菌、金黄色葡萄球菌等滋生，而前期对平坝区细菌感染情况的调查较少，导致养殖场盲目使用抗生素，病鹅产生细菌耐药性，给养殖场细菌病的防控带来极大困难。为平坝区养殖户的细菌病防控提供理论依据，收集2021年平坝区不同养殖场发病鹅的组织样品，开展细菌感染情况调查，明确平坝区细菌感染的感染率、不同细菌的分布情况等。

1 材料与方法

1.1 样品收集

2021年从贵州省安顺市平坝区采集76份发病鹅组织样品，包括鹅的脑组织、肝脏、肠道等，样品送至贵州省畜牧兽医研究所畜禽疫病研究室进行病原的分离和鉴定。

1.2 主要试剂

TSA 固体培养基、TSB 液体培养基、麦康凯培养基、甘露醇盐琼脂培养基、伊红美蓝培养基、沙门氏菌二代鉴别培养基等，购自青岛海博生物技术有限公司；新生牛血清，购自浙江天杭微生物科技股份有限公司；DNA 提取试剂盒、2×Pfu MasterMix，购自北京世纪康为生物科技有限公司；Puc57 克隆载体、DH5α、DNA Marker，购自宝生物工程有限公司。

1.3 样品的初步分离

组织样品在超净工作台内打开，用酒精棉擦拭组织样本外侧并灼烧，灼烧后的镊子将深层组织暴露。使用一次性医用棉签蘸取深层组织涂布于含0.5%酵母提取物和5%牛血清的TSA 培养基上，在含5% CO2培养箱内倒置培养，37 ℃培养16～32h后观察菌落形态，挑取单菌落传代培养对样品进行纯化。肠道内容物用一次性医用棉签蘸取，在BPW 培养基震荡培养48 h 后，取50 μL 接种至TTB 液体培养基中，震荡培养48 h 后平板划线至沙门氏菌二代鉴别培养基上，进行初步鉴定。经纯化后的菌落分别接种至麦康凯培养基、甘露醇盐琼脂培养基、伊红美蓝培养基、沙门氏菌二代鉴别培养基，鸭疫里氏杆菌和巴氏杆菌在含0.5%酵母提取物和5%牛血清的TSA 培养基上为圆润光滑的菌落，在无血清或无全血的培养基上不生长。大肠杆菌在麦康凯培养基上呈玫红色，在伊红美蓝培养基上呈黑色并带有金属光泽；沙门氏菌在沙门氏菌二代鉴别培养基上呈紫色圆形菌落；金黄色葡萄球菌在甘露醇盐培养基上呈含淡黄色晕环的金黄色菌落。根据不同细菌在不同培养基上的生长情况对其进行初步鉴定。

1.4 菌株的PCR鉴定

将初步鉴定的细菌扩大培养后，采用水煮法提取细菌DNA，采用表1 的引物对样品进行扩增，将PCR 鉴定后的菌株使用甘油肉汤液体培养基于－40 ℃保存。

2 结果与分析

2.1 鹅细菌感染的检测结果

对收集的76 份样品进行细菌分离鉴定，从表2可知，61份样品中分离出细菌94株，15份样品未分离出细菌，分离率80.3%。其中分离大肠杆菌41 株，分离率最高，为43.6%；鸭疫里氏杆菌30 株，分离率次之，为31.9%；分离沙门氏菌16 株，分离率17.0%；金黄色葡萄球菌7 株，分离率7.4%；未分离到巴氏杆菌。

表2 样品中不同细菌分离情况

2.2 鹅细菌的多重感染情况

从表3 可知平坝区的鹅细菌感染情况。76 份样品中，有33 份样品为单一细菌感染，单一感染大肠杆菌占比25.0%、单一感染鸭疫里氏杆菌占比11.8%，单一感染金黄色葡萄球菌占比3.9%，单一感染沙门氏菌占比2.6%。有28 份样品同时检出2 种以上细菌，其中大肠杆菌和鸭疫里氏杆菌混合感染占比14.5%，大肠杆菌和沙门氏菌混合感染占比6.6%，沙门氏菌和鸭疫里氏杆菌混合感染占比3.9%；大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合感染占比2.6%。有6 份样品同时检出大肠杆菌、沙门氏菌、鸭疫里氏杆菌3种细菌感染，占比7.9%。

表3 样品的细菌感染情况

续表3

3 讨论与结论

对平坝区2021年的病料进行收集和检测表明，大肠杆菌、鸭疫里氏杆菌、沙门氏菌是危害鹅场的主要病原细菌，临床感染致病性大肠杆菌的鹅关节肿大，跛行，有气囊炎、腹膜炎、心包炎、输卵管炎等，2 个月以内的鹅易感［2］。20日龄左右的雏鹅感染疫里氏杆菌概率极高，病死率居高不下，剖检最典型的症状是心脏、肝脏、气囊的纤维素性炎症［3］。沙门氏菌主要引起雏鹅的腹泻、糊肛以及肠外感染，鼠伤寒沙门氏菌是主要流行血清型［4］。葡萄球菌引起鹅内脏器官、肌肉出血［5］，发病率低。试验未检出巴氏杆菌，与采集样品为30日龄以内的鹅为主，而巴氏杆菌主要感染成年鹅和产蛋鹅，因此检出率低。试验中，单一细菌感染占比仅为43.3%，混合感染占比36.8%，提示细菌病感染情况复杂，应关注多种细菌的混合感染，加强细菌的流行病学监测，优化疫病防控措施，控制混合感染和继发感染，以减少细菌病的发生。