藓生马先蒿质量标准研究

焦兴苹，达洛嘉，杨凤梅

［青海省药品检验检测院，国家药品监督管理局中药（藏药） 质量控制重点实验室，青海省中藏药现代化研究重点实验室，青海 西宁 810016］

藓生马先蒿是传统藏药，在《四部医典》 《度母本草》 《宇妥本草》 《蓝琉璃》 中均有记载［1］，原标准收载于1995 年版《卫生部药品标准（藏药第一册） 》 中，来源为玄参科植物藓生马先蒿PedicularismuscicolaMaxim.的干燥花。夏季采收，阴干。藏文名“露如木保” “漏日莫保”，具有敛毒、生肌、清胃热的作用，藏医常用于食肉中毒。主治“培根木布” 病、热性腹泻、胃溃疡、胃出血、肺病等［2-3］，在藏成药“解毒胶囊” “四味石榴散” 中均有应用［1］。其根为民间中药材，异名土人参，具补元气、生津安神，强心之功［4］。目前收载标准中仅有基原、性状、显微鉴别等检验项目，缺少TLC 鉴别、检查、含量测定等关键项目，无法有效控制该药材质量。

课题组对青海省部分藏医院和藏药制药厂进行实地考察，发现藓生马先蒿实际用药部位为“干燥的全草”。调研结果显示藓生马先蒿花难采集，且采集晾干后质量严重损失，大规模生产中较难收集到大批量“干燥的花”，同时在《青海高原本草概要》［5］等部分文献中记载其可以全草入药［6-7］，因此实际应用中均以“干燥的全草” 入药。课题组在收集样品的过程中，发现调研结果与实际情况相符，以花收集样品较为困难。因此本实验以10批藓生马先蒿“干燥的全草” 为对象来研究。

1 材料

1.1 仪器 BX53 生物显微镜（日本Olympus 公司）； SQP 电子天平（德国Sartorius 公司）； LC-20高效液相色谱仪（日本岛津公司）； SX-4-10 箱式高温电阻炉 （天津市泰斯特仪器有限公司）；101A-2E 电热鼓风干燥箱（上海实验仪器厂有限公司）； LINOMAT 5 半自动点样仪（瑞士卡玛公司）；DT1028 CH 超声波提取器（德国Bandelin 公司）。

1.2 药材 10 批藓生马先蒿于2017 年至2020 年在青海、西藏、甘肃等地采集或收集，经青海省药品检验检测院焦兴苹主管药师鉴定为玄参科植物藓生马先蒿PedicularismuscicolaMaxim.干燥全草，具体见表1。

表1 样品信息Tab.1 Information of samples

1.3 试剂与药物 桃叶珊瑚苷 （批号111761-200601）、毛蕊花糖苷 （批号111530-201713，纯度92.5%）、京尼平苷酸 （批号111828-201805，纯度98.1%） 对照品 （中国食品药品检定研究院）。硅胶G 薄层板（10 cm×20 cm，青岛海洋化工厂、德国默克公司）。甲醇为色谱纯（德国默克公司）； 乙酸乙酯等其他试剂均为分析纯； 水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 基原鉴别 本品为多年生草本，干时多少变黑，多毛。根茎粗，有分枝，端有宿存鳞片。茎丛生，在中间者直立，在外围者多弯曲上升或倾卧，常成密丛。叶有柄； 叶片椭圆形至披针形，羽状全裂。花皆腋生，自基部即开始着生； 萼圆筒形，长达11 mm，基部三角形而连于萼管，向上渐细，均全缘，至近端处膨大卵形，具有少数锯齿； 花冠玫瑰色，外面有毛，盔直立部分很短，几在基部即向左方扭折使其顶部向下，前方渐细为卷曲或S 形的长喙，喙因盔扭折之故而反向上方卷曲。

2.2 性状鉴别 本品为干燥带花的全草。茎多断裂，细长且弯曲，偶见互生的叶，叶片细小多破碎。花多皱缩，棕褐色或浅紫色。花梗细长，萼齿5 枚。花冠近基部扭转，前方渐细成卷曲或S 形的长喙。气微香，味淡，微苦。见图1。

图1 藓生马先蒿性状鉴别图Fig.1 Trait identification image for P.muscicola

2.3 显微鉴别 本品为粉末黄绿色。花粉粒无色或淡黄色，球形直径18 ～25 μm，外壁薄，表面近光滑； 草酸钙晶体众多，散在或包含于细胞中； 网纹状细胞类圆形，成群存在于细胞中； 导管以螺纹为主。见图2。

图2 藓生马先蒿显微鉴别图Fig.2 Microscopic identification image for of P.muscicola

2.4 TLC 鉴别 取本品粉末0.5 g，加10 mL 甲醇超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液。取桃叶珊瑚苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL 含0.2 mg 该成分的溶液，作为对照品溶液。按照2020 年版《中国药典》 四部TLC 法（通则0502），吸取供试品、对照品溶液各10 μL，点于同一硅胶G 薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（8 ∶0.5 ∶1 ∶1） 为展开剂，展开，取出，晾干，3%三氯化铝乙醇溶液显色，在105 ℃下加热，室温放凉，在紫外光灯（365 nm） 下检视，结果见图3。由此可知，供试品在对照品相应位置处显相同的棕红色荧光斑点。

图3 藓生马先蒿TLC 色谱图Fig.3 TLC chromatogram of P.muscicola

2.5 水分 参照2020 年版《中国药典》 四部通则水分测定法第二法（烘干法） 测定，重复2 次，取平均值，结果见表2。

表2 水分、灰分、浸出物含量测定结果（%，n＝2）Tab.2 Results of water，ash and extract content determination （%，n＝2）

2.6 灰分 参照2020 年版《中国药典》 四部通则灰分测定法测定，重复2 次，取平均值，结果见表2。

2.7 浸出物 参照2020 年版《中国药典》 四部通则浸出物测定法中水浸出物测定法测定，重复2次，取平均值，结果见表2。

2.8 京尼平苷酸、毛蕊花糖苷含量测定 参考文献［8-10］ 报道。

2.8.1 色谱条件 Waters XBridge ®C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）； 流动相甲醇（A） -0.5%醋酸（B），梯度洗脱（0 ～10 min，10% A；10 ～55 min，10% ～57% A； 55 ～60 min，57% ～10%A）； 体积流量1.0 mL/min； 柱温25 ℃； 检测波长254 nm； 进样量10 μL。

2.8.2 对照品溶液制备 精密称取京尼平苷酸对照品13.08 mg、毛蕊花糖苷对照品12.73 mg，置于50 mL 棕色量瓶中，60% 甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到两者质量浓度分别为256.62、235.50 μg/mL 的母液，分别精密吸取5 mL，置于25 mL 棕色量瓶中，60% 甲醇稀释至刻度，即得（两者质量浓度分别为51.32、47.10 μg/mL）。

2.8.3 供试品溶液制备 取藓生马先蒿粉末（过3 号筛） 约0.1 g，精密称定，置于具塞棕色三角瓶中，加入25 mL 60%甲醇，密塞，称定质量，超声处理30 min，放冷，60%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.8.4 系统适用性考察 取对照品、供试品溶液适量，在“2.8.1” 项色谱条件下进样测定，结果见图4。以京尼平苷酸峰计，各成分色谱峰理论塔板数应大于3 000，分离度应大于1.5。

图4 各成分HPLC 色谱图Fig.4 HPLC chromatograms of various constituents

2.8.5 线性关系考察 分别精密吸取“2.8.2”项下母液0.5、1.0、2.0、3.5、5.0 mL，置于10 mL 棕色量瓶中，60%甲醇稀释至刻度，摇匀，得系列质量浓度，在“2.8.1” 项色谱条件下进样测定。以对照品质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y） 进行回归，得京尼平苷酸、毛蕊花糖苷方程分别为Y＝7 326.1X＋1 474 （r＝0.999 7）、Y＝6 788X＋13 360 （r＝0.999 9），分别在12.83 ～128.31、11.77 ～117.75 μg/mL 范围内线性关系良好。

2.8.6 精密度试验 精密吸取“2.8.2” 项下对照品溶液适量，在“2.8.1” 项色谱条件下进样测定6 次，测得京尼平苷酸、毛蕊花糖苷峰面积RSD分别为0.75%、0.43%，表明仪器精密度良好。

2.8.7 重复性试验 精密称取同一份藓生马先蒿（S10） 粉末6 份，按“2.8.3” 项下方法制备供试品溶液，在“2.8.1” 项色谱条件下进样测定，测得京尼平苷酸、毛蕊花糖苷含量RSD 分别为1.86%、0.61%，表明该方法重复性良好。

2.8.8 稳定性试验 取同一份供试品溶液（S10），于0、2、4、8、12、24 h 在“2.8.1” 项色谱条件下进样测定，测得京尼平苷酸、毛蕊花糖苷峰面积RSD 分别为0.28%、1.14%，表明溶液在24 h 内稳定性良好。

2.8.9 加样回收率试验 取各成分含量已知的藓生马先蒿（S10） 粉末6 份，每份约0.05 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入25 mL 对照品溶液，密塞，称定质量，超声处理30 min，放冷，60%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，0.45 μm微孔滤膜过滤，在“2.8.1” 项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，京尼平苷酸平均加样回收率为101%，RSD 为1.16%； 毛蕊花糖苷平均加样回收率为101%，RSD 为1.08%。

2.8.10 样品含量测定 取10 批藓生马先蒿粉末（过3 号筛） 各2 份，每份约0.1 g，精密称定，按“2.8.3” 项下方法制备供试品溶液，在“2.8.1”项色谱条件下进样测定，计算含量 （以干燥品计），结果见表3。

表3 各成分含量测定结果（%，n＝2）Tab.3 Results of content determination of various constituents （%，n＝2）

3 讨论

本实验以乙醇、稀乙醇、70% 乙醇、水为溶剂，分别采用冷浸法、热浸法对样品进行浸出物测定［11］，结果各方法所得含量依次为水浸出物-冷浸法（34.5%） ＞水浸出物-热浸法（34.3%） ＞稀乙醇浸出物-冷浸法（30.9%） ＞稀乙醇浸出物-热浸法（30.7%） ＞70% 乙醇浸出物-热浸法（26.2%）＞70%乙醇浸出物-冷浸法（25.3%） ＞乙醇浸出物-热浸法＞乙醇浸出物-冷浸法，考虑到操作方便、能源节约，最终采用水浸出物-冷浸法。另外，浸出物平均值为36.7%，下浮10% 约为33.0%，拟定藓生马先蒿中浸出物不得少于33.0%。

粉末鉴别中，显微镜下可观察到较多花粉粒、草酸高晶体、网纹状细胞、螺纹导管。检查项中，总灰分偏高，平均值为15.8%，故对其进行酸不溶性灰分测定，结果均较低，平均值为2.0%，说明藓生马先蒿总灰分偏高是其生理性灰分较高所致，拟定总灰分不得超过20.0%，酸不溶性灰分不得超过4.0%。

藓生马先蒿中含有环烯醚萜类、酚酸类、多种糖苷类成分［12］。所含桃叶珊瑚苷具有肝脏保护、抗氧化等作用［13-14］； 京尼平苷酸具有消炎利胆等作用，在临床上降压作用明显［15-16］； 毛蕊花糖苷有抗炎、抗氧化等作用［17-18］，均与藓生马先蒿主治功能相符，因此将桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、毛蕊花糖苷作为定性定量指标。采用不同生产厂家的硅胶G 板（青岛海洋化工厂、德国默克公司），在不同温度（15、25 ℃）、相对湿度（20%、35%）下桃叶珊瑚苷斑点均显色清晰，分离度均良好。另外，京尼平苷酸含量平均值为0.31%，毛蕊花糖苷含量平均值为1.78%，根据测定结果并结合采收季节、采收年限不同，暂定本品按干燥品计算，含京尼平苷酸（C16H22O10） 不得少于0.25%，毛蕊花糖苷（C29H36O15） 不得少于1.70%。