不同扭结方向秦艽中环烯醚萜苷类含量比较

何志鹏，王仕宝，陈垣，胡本祥，蔡子平，李霞

（1.陕西国际商贸学院 医药学院，陕西 西安 712046；2.甘肃农业大学 农学院，甘肃 兰州 730070；3.汉中职业技术学院 药学院，陕西 汉中 723000；4.汉中职业技术学院 秦巴山区药（食）用植物研究所，陕西 汉中 723000；5.甘肃省农业科学院 中药材研究所，甘肃 兰州 730070）

中药材秦艽其基原植物为龙胆科（Gentianaceae）龙胆属（Gentiana）。作为常用大宗药材，具有祛风湿，清湿热，止痹痛，退虚热等功效［1］。现代药理研究表明其具有抗炎、解热、镇痛等多种作用［2-4］。《中国药典》1963年版收录秦艽为龙胆科植物秦艽（Gentiana macrophyllaPall.）的干燥根，从1977年版开始收录的中药材秦艽均为龙胆科植物秦艽（G.macrophyllaPall.）、麻花秦艽（G. stramineaMaxim.）、粗茎秦艽（G. crassicaulisDuthie ex Burk.）或小秦艽（G. dahuricaFisch.）的干燥根［5-6］。

南北朝刘宋·雷斅《雷公炮炙论》曰：“凡使，秦并艽，须于脚文处认取。左文列为秦，即治疾；艽即发脚气［7］。”《日华子本草》《本草图经》《本草品汇精要》分别记载秦艽用根有罗纹者为佳［8-10］。《本草纲目》曰：“秦艽出秦中，以罗纹绞纠者佳，故名秦艽［11］。”明清本草《本草原始》《本草汇》《本草汇笺》《握灵本草》均对秦艽的品质做出评价，秦艽根形土黄色，以左文者为良［12-15］，这些评价均受到了《雷公炮炙论》的影响。唯有李时珍认为将秦艽分为“秦”与“艽”是一种谬用。至今部分学者认为秦艽以左旋者为佳，甚至称其为左秦艽。

根据观察，四种基原秦艽植物在生长过程中，有些主根扭曲不直，或部分药材各个分枝根相互缠绕扭结形成圆锥形，或多数分枝互相扭曲连合在一起形成网状或麻花状，由于秦艽药材主根纵向沟纹或分枝扭结的方向表现为左旋（逆时针扭结）和右旋（顺时针扭结）两类特征，为了描述方便，文中统一称为左旋秦艽和右旋秦艽。本研究以不同基原和产地的秦艽药材为研究材料，以左旋秦艽和右旋秦艽中三种环烯醚萜苷成分含量作为评价指标进行考察，从而为秦艽药材的资源开发利用提供参考依据。

1 试验仪器与材料

1.1 试验仪器

e2695高效液相色谱仪（美国Waters公司）；KQ-800KDE超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BASIC-T超纯水系统（赛多利斯科学仪器（北京））；QUINTIX224-1CN电子天平［d = 0.0001 g，赛多利斯科学仪器（北京）］；DHG-9240B鼓风干燥箱（上海鸿都电子科技有限公司）；FW-100超微粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）。

1.2 试药与材料

马钱苷酸（批号：111865-202005）、獐牙菜苦苷（批号：110785-201404）、龙胆苦苷（批号：110770-201918）均购于中国食品药品检定研究院；乙腈（色谱纯，天津光复精细化工研究所），醋酸（分析纯，天津科密欧化学试剂有限公司），甲醇（分析纯，天津科密欧化学试剂有限公司）。供试样品经甘肃农业大学农学院陈垣教授鉴定为龙胆科植物秦艽（G.macrophyllaPall.）、麻花秦艽（G. stramineaMaxim.）、粗茎秦艽（G. crassicaulisDuthie ex Burk.）和小秦艽（G. dahuricaFisch.）的干燥根。从样品中选取大小相近的根作为供试材料，经45℃烘箱干燥，粉碎，过三号筛（直径0.36 mm），备用。不同产地的基原药材信息见表1，性状见图1。

2 方法

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备

分别精密称取马钱苷酸对照品、獐牙菜苦苷对照品和龙胆苦苷对照品适量，用甲醇溶解并定容，使其浓度分别为0.2940 mg·mL-1、0.2458 mg·mL-1和0.2842 mg·mL-1，保存于4℃遮光的冰箱中备用。

2.1.2 供试品溶液的制备

称取经干燥后的秦艽供试样品0.5 g，置于150 mL的具塞锥形瓶中，按照不同液料比加入适量甲醇，称定重量，用封口膜封口，按照不同超声温度、超声时间、超声功率进行超声处理，冷却后去掉封口膜，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀后过滤，取续滤液，将续滤液用0.45 µm滤膜过滤，即得供试品溶液，在4℃遮光的冰箱中备用。

2.2 高效液相色谱检测设计

色谱条件：C18色谱柱（4.6 mm × 250 mm， 5 µm），流动相为乙腈-0.2%醋酸（9 ∶ 91），检测波长254 nm，流速1.0 mL·min-1，柱温25℃，进样量为10 µL。

精密量取马钱苷酸对照品、獐牙菜苦苷对照品和龙胆苦苷对照品混合储备液，用甲醇进行定容，配制成不同质量浓度的混合对照品梯度溶液，用0.45 µm微孔滤膜过滤，用高效液相色谱法（High performance liguid chromatography，HPLC）进行检测。以浓度作为横坐标，以混合对照品相对应的积分峰面积为坐标，绘制标准曲线。根据标准曲线方程得出秦艽供试品溶液中环烯醚萜苷类化合物的浓度，并计算其得率。

2.3 HPLC方法验证

2.3.1 精密度试验

准确量取待测秦艽混合对照品溶液，进样量10.0 µL，用HPLC测定6次，测定3种对照品的峰面积。

2.3.2 稳定性试验

取秦艽供试品溶液，进样量10.0 µL，分别在0、2、4、6、8、10、12、24、48 h进样并测定其峰面积，同时记录保留时间。

2.3.3 重复性试验

精密量取待测秦艽样品6份，按照“2.1.2”项中方法制备供试品溶液，进样量10.0 µL，测定样品中马钱苷酸、獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的峰面积。

2.3.4 加标回收试验

精密量取“2.1.2”项下待测供试品溶液1 mL，加甲醇定容至10 mL，用0.45 µm微孔滤膜过滤，作为试样；另精密量取供试品溶液1 mL，置于10 mL容量瓶中，再加入备用混合对照品溶液1 mL，用甲醇定容，用0.45 µm微孔滤膜过滤，作为加标试样。

2.3.5 HPLC标准曲线的建立

量取混合对照品溶液，用0.45 µm微孔滤膜过滤，按照“2.2”项下色谱条件依次进样2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 µL，测定其峰面积。分别以各色谱峰的峰面积为纵坐标，以对照品的质量为横坐标，制作标准曲线。得保留时间、线性回归方程以及相关系数和线性范围，回归方程及相关系数见表2，色谱图见图2。

表2 秦艽对照品线性回归方程及相关系数Tab.2 Linear regression equation and correlation coefficient of control samples from G. macrophylla

图2 HPLC图谱Fig.2 HPLC chromatogram

3 结果与分析

3.1 精密度、稳定性和重复性试验结果

按照“2.3.1”“2.3.2”“2.3.3”方法进行试验，其马钱苷酸、獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的精密度RSD在0.15% ～ 0.28%，稳定性RSD值在2.50% ～ 2.95%，重复性RSD在0 ～ 0.80%之间。表明其精密度、稳定性和重复性均良好。另外，加标回收试验结果见表3。

表3 环烯醚萜苷类化合物加标回收试验结果Tab.3 The results standard recovery of iridoid glycosides

3.2 不同产地左旋秦艽含量比较

结合图3和表4，在同一基原秦艽（G. macrophyllaPall.）不同产地左旋秦艽样品中，QJ3L的马钱苷酸含量最高，为1.78%，QJ4L的最低，为0.15%；QJ4L的獐芽菜苦苷含量最高，为1.14%，QJ7L的最低，为0.63%；QJ3L的龙胆苦苷含量最高，为16.70%，QJ6L的最低，为4.04%；QJ3L的三种环烯醚萜苷含量总和最高，为19.57%，QJ6L最低，为5.07%。在同一基原麻花秦艽（G. stramineaMaxim.）不同产地左旋秦艽样品中，QJ10L的马钱苷酸含量最高，为0.87%，QJ9L的最低，为0.33%；QJ11L的獐芽菜苦苷含量最高，为1.50%，QJ12L的最低，为0.26%；QJ10L的龙胆苦苷含量最高，为14.10%，QJ9L的最低，为0.89%；QJ10L的三种环烯醚萜苷含量总和最高，为16.08%，QJ9L的最低，为1.48%。

表4 左、右旋秦艽中环烯醚萜苷类成分含量Tab.4 Contents of iridoid glycosides in sinistral and dextral G. macrophylla

图3 不同产地左旋秦艽中环烯醚萜苷类化合物含量比较Fig.3 Comparison of the content of iridoid glycosides in sinistral G. macrophylla from different habitats

从表4得出，同一基原小秦艽（G. dahuricaFisch.）不同产地左旋秦艽样品中，QJ2L的马钱苷酸含量最高，为0.30%，QJ1L的最低，为0.26%；QJ1L的獐芽菜苦苷含量最高，为2.92%，QJ2L的最低，为2.27%；QJ1L的龙胆苦苷含量最高，为13.29%，QJ2L的最低，为10.76%；QJ1L的三种环烯醚萜苷含量总和最高，为16.48%，QJ2L的最低，为13.33%。同一基原粗茎秦艽（G. crassicaulisDuthie ex Burk.）左旋秦艽样品中，马钱苷酸含量为1.29%，獐芽菜苦苷含量为1.88%，龙胆苦苷含量为12.47%，三种环烯醚萜苷含量总和为15.64%。

最后对同一基原秦艽（G. macrophyllaPall.）的测定结果分析，以马钱苷酸、龙胆苦苷和獐牙菜苦苷三者总含量进行比较，总含量QJ3L（19.58%）＞QJ7L（9.35%）＞QJ5L（8.96%）＞QJ4L（7.58%）＞QJ6L（5.06%），可见四川若尔盖产地总含量最高，新疆玛纳斯县最低；同理，对同一基原麻花秦艽（G. stramineaMaxim.）的测定结果分析及比较，总含量QJ10L（16.08%）＞QJ11L（6.76%）＞QJ12L（4.75%）＞QJ9L（1.48%），可见甘肃玛曲产地总含量最高，青海同仁县最低，其它产地介于中间；对同一基原小秦艽（G.dahuricaFisch.）结果分析及比较，总含量QJ1L（16.47%）＞QJ2L（13.33%），得出内蒙古阿鲁科尔沁旗总含量最高，陕西凤县含量最低。

3.3 不同产地右旋秦艽含量比较

结合图4和表4，同一基原秦艽（G. macrophyllaPall.）不同产地右旋秦艽样品中，QJ5R的马钱苷酸含量最高，为2.79%，QJ4R的最低，为0.09%；QJ4R的獐芽菜苦苷含量最高，为1.44%，QJ6R的最低，为0.42%；QJ3R的龙胆苦苷含量最高，为16.66%，QJ6R的最低，为5.04%；QJ3R的三种环烯醚萜苷含量总和最高，为19.51%，QJ6R的最低，为6.91%。同一基原麻花秦艽（G. stramineaMaxim.）不同产地右旋秦艽样品中，QJ10R的马钱苷酸含量最高，为1.90%，QJ11R的最低，为0.15%；QJ10R的獐芽菜苦含量最高，为1.27%，QJ9R的最低，为0.20%；QJ10R的龙胆苦苷含量最高，为14.85%，QJ9R的最低，为1.39%；QJ10R的三种环烯醚萜苷含量总和最高，为18.03%，QJ9R的最低，为1.93%。

从表4得出，同一基原小秦艽（G. dahuricaFisch.）不同产地右旋秦艽样品中，QJ1R的马钱苷酸含量最高，为0.33%，QJ2R的最低，为0.23%；QJ1R的獐芽菜苦苷含量最高，为2.97%，QJ2R的最低，为2.60%；QJ1R的龙胆苦苷含量最高，为16.49%，QJ2R的最低，为14.94%；QJ1R的三种环烯醚萜苷含量总和最高，为16.48%，QJ2R的最低，为14.93%。同一基原粗茎秦艽（G. crassicaulisDuthie ex Burk.）右旋秦艽样品中，马钱苷酸含量为1.20%，獐芽菜苦苷含量为1.73%，龙胆苦苷含量为11.58%，三种环烯醚萜苷含量总和为14.51%。

对同一基原秦艽（G. macrophyllaPall.）的测定结果分析，以马钱苷酸、龙胆苦苷和獐牙菜苦苷三者总含量进行比较，总含量QJ3R（19.52%）＞QJ5R（14.26%）＞QJ7R（9.43%）＞QJ4R（8.66%）＞QJ6R（6.90%），可见四川若尔盖产地秦艽样品的总含量最高，新疆玛纳斯县的最低；同理，对同一基原麻花秦艽（G. stramineaMaxim.）的测定结果分析及比较，总含量QJ10R（18.02%）＞QJ11R（5.57%）＞QJ12R（4.96%）＞QJ9R（1.93%），可见甘肃玛曲产地麻花秦艽样品的总含量最高，青海同仁县的最低，其它产地介于中间；对同一基原小秦艽（G. dahuricaFisch.）结果分析及比较，总含量QJ1R（16.48%）＞QJ2R（14.93%），得出内蒙古阿鲁科尔沁旗产地小秦艽样品的总含量最高，陕西凤县的含量最低。

通过以上对不同产地左、右旋秦艽含量大小顺序比较，得出不论何种基原，其测定结果含量排序基本趋于一致。即四川若尔盖秦艽样品的含量最高，新疆玛纳斯县的最低；甘肃玛曲麻花艽样品的含量最高，青海同仁县的最低；内蒙古阿鲁科尔沁旗小秦艽样品的总含量最高，陕西凤县的总含量最低。也就是说，产地对秦艽药材的含量影响最大。

3.4 左、右旋秦艽含量比较

结合图5和表4，对左、右旋秦艽样品的含量进行对比。以马钱苷酸含量作为考察指标，样品QJ2、QJ3、QJ4、QJ8、QJ11均为左旋秦艽高于右旋秦艽；样品QJ1、QJ5、QJ6、QJ7、QJ9、QJ10、QJ12均为右旋秦艽高于左旋秦艽。以獐芽菜苦苷含量作为考察指标，样品QJ3、QJ6、QJ7、QJ8、QJ9、QJ11均为左旋秦艽高于右旋秦艽；样品QJ1、QJ2、QJ4、QJ5、QJ10、QJ12均为右旋秦艽高于左旋秦艽。以龙胆苦苷含量作为考察指标，样品QJ1、QJ3、QJ7、QJ8、QJ11均为左旋秦艽高于右旋秦艽；样品QJ2、QJ4、QJ5、QJ6、QJ9、QJ10、QJ12均为右旋秦艽高于左旋秦艽。以三种环烯醚萜苷含量总和作为考察指标，样品QJ3、QJ8、QJ11均为左旋秦艽高于右旋秦艽；但是QJ1、QJ2、QJ4、QJ5、QJ6、QJ7、QJ9、QJ10、QJ12均为右旋秦艽高于左旋秦艽。

3.5 24批秦艽样品结果比较

从左旋秦艽和右旋秦艽的含量比较中得出：以马钱苷酸含量进行比较，其中5批样品（QJ2L、QJ3L、QJ4L、QJ8L和QJ11L）的含量左旋高于右旋；7批样品（QJ1R、QJ5R、QJ6R、QJ7R、QJ9R、QJ10R和QJ12R）的含量右旋高于左旋。以獐牙菜苦苷含量大小比较，其中6批样品（QJ3L、QJ6L、QJ7L、QJ8L、QJ9L和QJ11L）的含量左旋高于右旋；6批样品（QJ1R、QJ2R、QJ4R、QJ5R、QJ10R和QJ12R）的含量右旋高于左旋；以龙胆苦苷含量进行比较，其中5批样品（QJ1L、QJ3L、QJ7L、QJ8L和QJ11L）的含量左旋高于右旋；7批样品（QJ2R、QJ4R、QJ5R、QJ6R、QJ9R、QJ10R和QJ12R）的含量右旋高于左旋。同理，以三者总含量进行比较，只有3批样品（QJ3L、QJ8L和QJ11L）左旋高于右旋，占比25%；其余9批样品（QJ1R、QJ2R、QJ4R、QJ5R、QJ6R、QJ7R、QJ9R、QJ10R和QJ12R）右旋均高于左旋。

此外，结合表5，通过所有的左、右旋秦艽样品进行分析，以马钱苷酸、龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的含量累计值对比，其中左旋样品含量分别为8.08%、102.50%、14.47%；右旋样品含量分别为11.77%、108.80%、14.61%；同理，左、右旋秦艽样品总含量累计值分别为125.06%和135.18%。通过上述样品含量对比分析，得出本次试验所有样品中，有75%的右旋秦艽其总含量高于左旋秦艽，而且左旋秦艽相比右旋秦艽总含量累计值少10.12个百分点。

4 小结

《本草原始》《本草汇》《本草汇笺》《握灵本草》等记载的“秦艽以左文者良”，这可能是古人对秦艽临床疗效的总结［12-15］。本文旨在探究不同左、右旋秦艽品质是否存在差异，或者左旋秦艽品质是否高于右旋秦艽。由于药材的品质评价通常指药材产品的内在质量，直接影响到药材产品的经济价值和临床疗效。一般而言，品质评价采用三种指标进行分析。其一，物理指标，主要是指药材的性状特征；其二，化学有效成分指标，主要是指有效成分的种类和含量高低；其三，安全性指标，主要是指药材的农残、有毒金属元素及限量等。本文仅对秦艽药材环烯醚萜苷的各成分含量以及总含量进行测定和分析，即仅对化学有效成分指标进行分析，因此，品质评价较为片面。此外，样品数量只有24批次，样品数量较少，缺乏统计学意义。另外，本文基于不同产地、不同基原的左、右旋秦艽比较，得出该研究中多数右旋秦艽总含量高于左旋秦艽。狭义来讲，目前可暂且认为右旋秦艽品质优于左旋。这一结论以后还需结合大量样本进行含量测定及统计分析，同时开展药理实验进行全面验证。

秦艽在生长过程中，各个侧根相互缠绕扭结形成圆锥形。按照侧根的扭结方向，可以分为左旋（逆时针缠绕）秦艽和右旋（顺时针缠绕）秦艽两类药材。以上不同形态与药材品质是否具有一定的必然联系？基于这个问题，将所收集的产自内蒙古、新疆、青海、陕西、四川、云南和甘肃七个不同产区、四个基原合计24批次样品（左、右旋各12批），通过HPLC对不同产地、不同基原的左旋秦艽和右旋秦艽的马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷以及三者总含量的检测比较，最终给予品质评价。另外，道地药材的品质往往受到不同自然环境和人为文化的影响，如地理环境、水质土壤、气候地形、药材区划、时令节气等诸多因素［16-21］。中药材治病的物质基础，是基于自身内部组织固有的化学成分群及其主要成分含量［22］。因此，评价中药材质量的等级或优劣，目前仍然以其所含有效成分群的组成和含量的高低为评价标准，秦艽作为常用药材也不例外。