苦参素对肝癌耐药细胞株HepG2/ADM的作用及机制研究

王昭辉 王国兴 郭东雅

肝癌是全球第二大恶性肿瘤,其发生率和致死率仅次于肺癌,放化疗是临床上治疗肝癌的常用手段,但长期使用化疗药物会导致患者出现耐药性,因此大大降低了临床疗效[1]。传统中药因多靶点、低毒性的优点受到学者广泛关注,苦参素又名氧化苦参碱,是从中药苦参中提取分离得到的一种生物碱,具有广泛抗肿瘤活性。研究发现,苦参素可增强化疗药物抗肿瘤效果,提高肝癌荷瘤小鼠免疫功能[2]。苦参素可抑制肝癌HepG2细胞上皮间质转化,降低癌细胞增殖、迁移和侵袭能力[3]。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)信号通路激活与多种恶性肿瘤的进展有关,过表达miR-429可通过抑制ERK/MAPK信号通路降低肝癌HepG2细胞增殖、迁移和侵袭[4]。白芥子穴位贴敷通过阻碍ERK1/2激活可抑制肝癌H22移植瘤生长[5]。基于以上苦参素和ERK/MAPK信号通路在肝癌中的相关研究,本研究主要探讨苦参素是否能通过抑制ERK/MAPK信号通路逆转肝癌细胞化疗药物耐药性。

1 材料与方法

1.1 细胞系

人肝癌细胞株HepG2和人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM均购自美国ATCC公司。

1.2 试剂和仪器

苦参素购自宝鸡市万晟生物开发有限公司;培养基和胎牛血清购自美国Sigma公司;细胞凋亡检测试剂盒和MTT试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司;阿霉素购自深圳万乐药业有限公司;p-ERK1/2、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer drug resistance protein,BCRP)和肺耐药蛋白(pulmonary resistance protein,LRP)抗体购自美国Abcam公司;倒置显微镜购自日本奥林巴斯公司;多功能酶标仪和凝胶成像仪购自美国Bio-Rad公司;流式细胞仪购自美国Becton Dickinson公司。……